海洋真菌源丁内酯-Ⅰ改善肠道炎症的效果评价

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炎性肠病(IBD)严重影响动物的消化吸收能力,导致生长发育和生产性能下降,给养殖业带来巨大经济损失。研究开发具有免疫调节、肠道屏障和菌群稳态维持功能的天然活性物质备受关注。丁内酯-Ⅰ(BTL-1)是从海洋真菌土曲霉菌中提取的一种代谢物,具有较好的抗炎和粘膜修复活性,有开发为功能饲料添加剂的潜力。但有关其保护动物肠道屏障功能和缓解炎症反应的效果及潜在机制尚不清楚,限制了进一步的开发应用。为了综合评价BTL-1改善肠道炎症的作用效果及可能机制,本研究分别建立了LPS诱导的IPEC-J2炎症模型、LPS诱导的MODE-K细胞炎症模型和DSS诱导的小鼠IBD模型,分析了其抗炎、粘膜屏障改善和肠道菌群平衡维持的功能及相关信号通路响应。结果发现,在IPEC-J2和MODE-K中,50μM BTL-1有效地抑制了TLR4的表达、IκB和P65的磷酸化、p-P65的入核及炎性因子的表达,显著提高了细胞活力(p≤0.05)。同时BTL-1还上调了TJ(ZO-1、Occludin、Claudin-1)蛋白和AJ(β-catenin)蛋白的表达,提高了体外肠屏障模型的TEER值及降低了FITC-dextran通过率(p≤0.05)。在小鼠中,5 mg/kg BTL-1有效地缓解了DSS引起的日采食量下降、平均日增重下降、精神萎靡、血便和贫血等症状,显著降低了DAI、白细胞总数及免疫器官指数;改善了DSS导致的结肠缩短及粘膜结构损伤。对炎症信号通路的检测发现,BTL-1显著下调了TLR4的表达,抑制了IκB、P65、JNK、P38和ERK1/2的磷酸化,下调了炎性因子的表达(p≤0.05)。同时,BTL-1明显上调TJ蛋白和AJ蛋白的表达,显著降低了FITC-dextran通过率和血清中DAO、LPS和D-LA的含量(p≤0.05)。对肠道菌群结构的检测发现,BTL-1显著提高了肠道微生物多样性,尤其是肠道中Muri菌属和乳杆菌属的丰度,相关性分析发现TJ/AJ蛋白的表达与约氏乳杆菌(LJ)呈极显著正相关(p≤0.05)。为进一步探究LJ在BTL-1改善肠道炎症反应中的作用,体外培养发现BTL-1能够显著提高LJ的生长效率(p≤0.05)。灌服LJ能有效缓解DSS引起的小鼠采食量/日增重下降、精神萎靡、血便和贫血等症状。显著降低DAI、白细胞总数及免疫器官指数,并改善DSS导致的结肠缩短及结构损伤。LJ还下调了COX-2、i NOS以及炎性因子IL-1β的表达(p≤0.05)。同时,LJ上调了TJ(Occludin、Claudin-2、Claudin-4)和AJ(E-cadherin、β-catenin)蛋白的表达,显著降低FITC-dextran的通过率和血清中DAO、LPS和D-LA的含量(p≤0.05),提示LJ能够调上TJ和AJ蛋白的表达从而保护小鼠肠道屏障。综上,BTL-1能通过抑制TLR4/NF-κB及MAPK信号通路而改善肠道炎症。BTL-1可能通过提高肠道微生物多样及有益菌丰度而改善肠道健康。BTL-1抗炎和粘膜屏障维持可能通过增加LJ丰度实现。研究成果为BTL-1作为肠炎功能饲料添加剂的开发奠定了理论基础。
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