研究目的:探究补阳还五汤抗动脉粥样硬化（AS）的质量标志物（Q-markers）及其在正常大鼠与慢性炎症模型大鼠体内的药代动力学过程。研究方法:1补阳还五汤抗AS的Q-markers预测1.1基于网络药理学的补阳还五汤抗AS药效物质基础及作用机制研究基于网络药理学的方法筛选出补阳还五汤中红花、桃仁、赤芍、川芎、当归、黄芪、地龙7种药材中抗AS的核心成分和靶点,并通过核心靶点KEGG通路分析预测补阳还五汤抗AS的作用机制。1.2基于文本挖掘补阳还五汤抗AS的Q-markers基于文献查找的方法于CNKI数据库检索获取补阳还五汤中6种药材的可测成分（补阳还五汤复方由红花、川芎、桃仁、当归尾、赤芍、黄芪、地龙7味药材组成,其中地龙为动物药,目前,有较多研究以其核苷类成分（如尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷等）进行质量控制,但这些成分入血后较难与机体原有物质区分,故含药血浆/血清质量标志物筛选过程中,对地龙的这些成分不予考虑。）;通过文献计量数据库计量上述获取成分的研究频率;于CNKI、Web of Science数据库验证成分（文献计量≥5）与AS的功效关联性,以确定补阳还五汤抗AS的Q-markers。2补阳还五汤抗AS的Q-markers质量控制研究采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm,1.7?m）色谱柱,柱温40℃,以0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱,体积流量0.3 m L?min^-1,电喷雾离子化（ESI）源,正离子模式扫描,多反应监测模式（MRM）检测补阳还五汤抗AS的Q-markers（羟基红花黄色素-A、苦杏仁苷、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、黄芪甲苷、正丁烯基苯酞和Z-蒿本内酯）。3补阳还五汤抗慢性炎症的药效学研究雄性SD大鼠59只,以随机数字表法分为6组,分别为:（1）正常对照组（n=7）;（2）慢性炎症模型组（n=11）;（3）阳性药醋酸泼尼松龙组（n=8）;（4）补阳还五汤低剂量组（n=11）。（5）补阳还五汤中剂量组（n=11）;（6）补阳还五汤高剂量组（n=11）;除正常对照组外,其余组每周首日尾静脉小剂量注射造模剂LPS（200?g/kg）,正常对照组注射等体积无菌生理盐水,共注射4次,首次注射后次日开始灌胃给药,共持续4周。测定各组大鼠的肛温、脾脏湿重、胸腺湿重、血白细胞计数、Gran%、Mon%、Lymph%、hs-CRP、IL-6、TNF-α含量及血浆MDA含量和SOD活力变化,观察SD大鼠体内炎症状态。4大鼠血浆中补阳还五汤抗AS的Q-markers的UPLC-MS/MS含量测定方法采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm,1.7?m）色谱柱,柱温40℃,以0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱,体积流量0.3 m L?min^-1,电喷雾离子化（ESI）源,电喷雾离子化（ESI）正负离子切换模式扫描,多反应监测模式（MRM）检测血浆中补阳还五汤抗AS的Q-markers（羟基红花黄色素-A、苦杏仁苷、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、黄芪甲苷、正丁烯基苯酞和Z-蒿本内酯）。5补阳还五汤抗AS的Q-markers及其在正常及慢性炎症大鼠体内的药代动力学研究雄性SD大鼠60只随机分为6组,补阳还五汤低、中、高剂量正常对照组分别为8只,补阳还五汤低、中、高剂量慢性炎症组分别为12只,灌胃给药后,按0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.5、2、3、4、6、12、24 h时间点从大鼠眼底静脉丛分别取血约0.4 m L,立即在高速冷冻离心机离心10 min(3500 r?min^-1),移取上清液,冷冻保存于-80℃冰箱。采用方法4中条件测定8个Q-markers的血药浓度,使用Win Nonlin 6.3药动学处理软件及SPSS统计分析软件分析Q-markers的药代动力学参数。研究结果:1补阳还五汤抗AS的Q-markers预测1.1基于网络药理学补阳还五汤抗AS药效物质基础及作用机制研究筛选出补阳还五汤除地龙以外的红花、桃仁、赤芍、川芎、当归、黄芪6味药材抗AS核心成分各13、10、12、32、25、11个,共计103个核心成分,为补阳还五汤抗AS的药效物质基础;通过网络药理学方法筛选出的14个核心靶点的KEGG通路分析结果表明补阳还五汤可通过干预花生四烯酸代谢通路发挥抗炎抗氧化作用,阻止内皮损伤,改善AS。1.2基于文本挖掘补阳还五汤抗AS的Q-markers本研究分析确定了8个效应成分:羟基红花黄色素-A、苦杏仁苷、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、黄芪甲苷、正丁烯基苯酞、Z-蒿本内酯。8个文本挖掘的效应成分与基于网络药理学方法获取的补阳还五汤抗AS药效物质具有较高的重合度,而分别来源于赤芍、红花与桃仁这3种药材的羟基红花黄色素-A、芍药内酯苷与苦杏仁苷3个成分在基于网络药理学方法获取的补阳还五汤抗AS药效物质中并未体现,究其原因,追溯得知在赤芍、红花、桃仁3种药材的化学成分时,因上述3个成分在TCMSP数据库中筛选不满足Lipinski（类药性）规则及OB（口服生物利用度）≥30%成分筛选条件,故在成分获取过程中被排除在外。2补阳还五汤抗AS的Q-markers质量控制研究羟基红花黄色素-A质量浓度在10.00?1350.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9999）,苦杏仁苷、芍药内酯苷、芍药苷质量浓度在2.00?2700.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9999）,阿魏酸的质量浓度在5.00?675.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9998）,黄芪甲苷、正丁烯基苯酞、Z-蒿本内酯质量浓度在2.00?270.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率分别为94.61%、91.85%、100.54%、96.27%、105.22%、108.15%、104.13%和99.79%;RSD分别为8.54%、8.98%、5.17%、3.71%、6.24%、3.88%、5.00%和7.13%;补阳还五汤样品中抗AS的8个Q-markers的含量RSD均<5%。3补阳还五汤抗慢性炎症的药效学研究与正常对照组相比,慢性炎症模型组大鼠肛温（P<0.05）、脾脏湿重（P<0.01）、胸腺湿重（P<0.05）、白细胞计数（P<0.05）、Gran%（P<0.05）、Mon%（P>0.05）、Lymph%（P>0.05）、hs-CRP（P<0.05）、IL-6（P<0.05）、TNF-α（P<0.01）、MDA（P<0.01）上升;同时慢性模型组SOD（P<0.01）、Lymph%（P<0.05）下降。与慢性炎症模型组相比,各给药组大鼠肛温有上升趋势,第四周补阳还五汤中剂量组大鼠肛温显著下降（P<0.05）;各给药组脾脏系数有一定下降趋势,醋酸泼尼松龙组脾脏系数极显著性下降（P<0.01）;补阳还五汤低剂量组胸腺系数显著性下降（P<0.05）,醋酸泼尼松龙组胸腺系数极显著性下降（P<0.01）;白细胞计数补阳还五汤低、中剂量组有下降趋势,醋酸泼尼松龙组极显著下降（P<0.01）;补阳还五汤中、高剂量组、醋酸泼尼松龙组Gran%、Mon%有下降趋势;补阳还五汤中、高剂量组、醋酸泼尼松龙组Lymph%有上升趋势;各给药hs-CRP有下降趋势,且补阳还五汤低、高剂量组显著下降（P<0.05）;各给药组的IL-6有下降趋势,补阳还五汤低、中剂量组、醋酸泼尼松龙组极显著下降（P<0.01）;各给药组的TNF-α有下降趋势,补阳还五汤低、中、高3个剂量组的TNF-α极显著下降（P<0.01）,醋酸泼尼松龙组的TNF-α显著下降（P<0.05）;各给药组的MDA有下降趋势,补阳还五汤低剂量组、醋酸泼尼松龙组的MDA显著下降（P<0.05）,补阳还五汤中剂量组的MDA极显著下降（P<0.01）;各给药组的SOD活力有升高趋势,补阳还五汤低、中、剂量组及醋酸泼尼松龙组SOD活力显著升高（P<0.05）,补阳还五汤高剂量组的SOD活力极显著升高（P<0.01）。4大鼠血浆中补阳还五汤抗AS的Q-markers的UPLC-MS/MS含量测定方法羟基红花黄色素-A、苦杏仁苷质量浓度在5.00?600.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9973,0.9959）,芍药内酯苷、芍药苷质量浓度在2.00?450.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9948,0.9996）,阿魏酸的质量浓度在1.00?450.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9958）,黄芪甲苷在0.10?60.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9978）、正丁基烯苯肽在6.00?600.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9999）、Z-蒿本内酯质量浓度5.00?270.00 ng?m L^-1的范围内线性关系良好（r=0.9999）,各成分回收率在50.84%?111.86%,日内、日间精密度RSD≤10.27%,准确度及稳定性均符合体内药物分析的要求。5补阳还五汤抗AS的Q-markers及其在正常及慢性炎症大鼠体内的药代动力学研究在补阳还五汤低、中、高剂量给药后各时间点含药血浆中均未检测到正丁烯基苯酞、Z-蒿本内酯2个成分。分析其余6种成分的非房室模型药代动力学参数,结果表明,与正常对照组大鼠比较,低剂量组大鼠血浆中的羟基红花黄色素-A的AUC_0→t有升高趋势;模型中、高剂量组大鼠血浆中的6种成分的C_max、AUC_0→t均呈现下降趋势,并且高剂量组大鼠血浆中的羟基红花黄色素-A、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、黄芪甲苷的C_max、AUC_0→t均显著性下降（P<0.05）;低、中、高剂量组大鼠血浆中6种成分的CL均呈现升高趋势。结论:1、基于网络药理学方法预测的补阳还五汤抗AS的药效物质基础,可为补阳还五汤抗AS的Q-markers的筛选提供部分理论依据。补阳还五汤干预花生四烯酸代谢通路诱发的血管内皮等机体慢性炎症,可能是其抗AS的作用机制之一。2、文本挖掘的8个药效成分（羟基红花黄色素-A、苦杏仁苷、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、黄芪甲苷、正丁烯基苯酞、Z-蒿本内酯）,具有一定的特有性、可测性及药效关联性,可作为补阳还五汤抗AS的Q-markers,并可建立补阳还五汤全程质量控制体系使用。3、建立的补阳还五汤和补阳还五汤含药血浆中8个抗AS的Q-markers测定方法学,具有良好的稳定性,为补阳还五汤质量控制及药代动力学研究提供可靠的方法学依据。4、本研究复制了稳定的LPS诱导的慢性炎症模型,用于补阳还五汤慢性炎症大鼠体内的药代动力学和药效学研究。通过分析主要药动学参数,发现慢性炎症对补阳还五汤抗AS的主要效应成分药代动力学行为具有一定的影响,可能是慢性炎症改变了体内部分药物转运体与药物代谢酶的调节和功能,而引起效应成分药代动力学过程发生变化。同时,大量研究表明AS是一种慢性炎症疾病,本研究初步阐明了补阳还五汤可干预LPS诱导的慢性炎症,具有较好的抗炎抗氧化作用,其可能是补阳还五汤抗AS的作用机制之一。