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第一部分hsa＿circ＿0060927在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义分析目的:探讨hsa＿circ＿0060927在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织和匹配癌旁正常组织中的表达,结合临床病例资料分析hsa＿circ＿0060927与ESCC临床生物学指标之间的关系及预后意义。方法:1.应用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测60例ESCC组织及匹配癌旁正常组织中hsa＿circ＿0060927的表达。2.通过统计学软件分析hsa＿circ＿0060927的差异表达与ESCC患者临床生物学指标及其预后的关系。结果:1.hsa＿circ＿0060927在60例ESCC组织及匹配癌旁正常组织中均表达,在ESCC组织中表达水平显著高于癌旁正常组织。2.通过统计学分析,hsa＿circ＿0060927的差异表达与ESCC患者的年龄、性别和病理分级均无相关性（P＞0.05）,与临床分期、T分期和N分期（P＜0.05）呈正相关。提示hsa＿circ＿0060927与ESCC的诊断及预后存在联系。小结:ESCC组织中hsa＿circ＿0060927表达上调,hsa＿circ＿0060927高表达与ESCC患者的临床病理不良指标和不良预后呈正相关,提示hsa＿circ＿0060927可能是预测ESCC进展的诊断和预后的潜在标志物。第二部分hsa＿circ＿0060927对食管鳞状细胞癌细胞生物学功能影响的研究目的:分析hsa＿circ＿0060927对ESCC细胞生物学功能的影响。方法:1.应用qRT-PCR法检测hsa＿circ＿0060927在ESCC细胞株TE1、K YSE170、KYSE150和KYSE30中的表达。2.通过RT-PCR实验验证hsa＿circ＿0060927在ESCC细胞中的表达状况。3.通过放线菌素D实验验证hsa＿circ＿0060927在ESCC细胞中表达的稳定性。4.在ESCC细胞株TE1和KYSE170中转染hsa＿circ＿0060927过表达载体,应用qRT-PCR法检测hsa＿circ＿0060927的转染效率。5.通过CCK-8实验、平板克隆形成实验检测转染hsa＿circ＿0060927过表达载体后,TE1和KYSE170细胞增殖能力的变化。6.通过划痕愈合实验以及Transwell实验检测转染hsa＿circ＿0060927过表达载体后,TE1和KYSE170细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:1.qRT-PCR实验结果显示在ESCC细胞株TE1、KYSE170、KYSE150和KYSE30中,TE1和KYSE170细胞hsa＿circ＿0060927相对表达水平较低,故选取此细胞株用于后续hsa＿circ＿0060927过表达载体的转染。2.RT-PCR实验结果显示,线性转录本在TE1和KYSE170细胞的c DNA和g DNA中均可扩增出来,而环状转录本只有在TE1和KYSE170细胞的c DNA中才能扩增出来,验证了hsa＿circ＿0060927在ESCC细胞中的存在。3.放线菌素D实验验证,在ESCC细胞中hsa＿circ＿0060927比其相应的线性转录本更具有稳定性。4.qRT-PCR实验结果显示,检测转染hsa＿circ＿0060927过表达载体后,TE1和KYSE170细胞中的相对表达水平相比较于空白对照组均上升,差异有统计学意义（P＜0.05）。5.CCK-8实验、平板克隆形成实验结果显示,KYSE170和TE1转染hsa＿circ＿0060927过表达载体后细胞增殖能力增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。6.Transwell实验和细胞划痕实验结果表明,KYSE170和TE1细胞转染hsa＿circ＿0060927过表达载体后,细胞迁移能力和侵袭能力增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。小结:hsa＿circ＿0060927在ESCC细胞株中稳定表达,能够促进TE1和KYSE170细胞的增殖、迁移及侵袭能力,可能在ESCC的发生和发展中起着促癌调控作用。第三部分hsa＿circ＿0060927对食管鳞状细胞癌调控机制的初步研究目的:探讨hsa＿circ＿0060927调控ESCC发展的作用机制方法:1.运用基因芯片技术分析hsa＿circ＿0060927基因敲低前后表达差异较大的基因,通过qRT-PCR验证,结合京都基因和基因组百科全书通路（K EGG）富集分析,筛选hsa＿circ＿0060927调控ESCC进展的下游靶基因。2.在ESCC细胞株中转染hsa＿circ＿0060927过表达载体。3.细胞免疫化学法测定在TE1及KYSE170细胞中过表达hsa＿circ＿0060927后CCL5蛋白的表达变化。4.应用qRT-PCR及ELISA法检测TE1和KYSE170细胞过表达hs a＿circ＿0060927后CCL5m RNA和蛋白的表达变化。5.通过挽救实验检测KYSE30及KYSE150细胞敲低hsa＿circ＿0060927同时过表达CCL5后对CCL5m RNA和蛋白的表达变化。结果:1.初步筛选CCL5为hsa＿circ＿0060927调控ESCC发生发展的下游靶向基因。2.细胞免疫化学法分析结果显示,过表达hsa＿circ＿006092后ESCC细胞内CCL5蛋白表达升高。3.qRT-PCR及ELISA检测结果显示,过表达hsa＿circ＿0060927后TE1及KYSE170细胞相比较对照CCL5m RNA和蛋白的表达升高（P＜0.05）。4.挽救实验结果显示,敲低hsa＿circ＿0060927可抑制ESCC细胞的CCL5m RNA和蛋白的表达,而补充CCL5后可部分缓解敲低hsa＿circ＿0060927对ESCC细胞CCL5m RNA和蛋白的表达的抑制作用（P＜0.05）。小结:hsa＿circ＿0060927可能通过靶向结合CCL5参与ESCC的发生发展。