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流产衣原体(C.abortus)是一种专性胞内菌,为革兰染色阴性,能够引起山羊、绵羊、牛、猪、马等的衣原体病,导致动物流产,给我国养殖业带来巨大的经济损失。同时,流产衣原体能够感染怀孕妇女,导致怀孕妇女流产,这给人类公共卫生构成了巨大威胁。目前,商品化疫苗只有基于C. abortus温度敏感菌株1B菌株发展而来的弱毒活疫苗,该疫苗被用于预防山羊和绵羊感染C. abortus导致的流产,起到了重要的作用,但是该疫苗的保护效果并不完全,并且弱毒疫苗存在毒力返强的潜在危险,因此,开发安全有效的新型亚单位疫苗是十分必要的。Pmp18蛋白是多型外膜蛋白家族的一个成员,该蛋白N端外露,C端位于胞内,属于V型分泌系统,具有很高的免疫原性和诊断价值。前期研究已经利用Pmp18蛋白建立的间接ELISA方法检测临床血清样品,证明其具有很高的特异性和敏感性,本研究重点在于对Pmp18蛋白N端的免疫原性进行系统的评价,构建3种不同组方的疫苗,对其免疫效果进行系统的评价,并且对Pmp18蛋白体外刺激DC细胞的免疫应答机理做了进一步研究,为流产衣原体新型疫苗的开发及免疫机理研究奠定基础。本研究主要实验如下：1.rVCG-Pmp18N的构建：将Pmp18N基因克隆到pSTV66质粒中,之后电转到霍乱弧菌V912(之前己转化裂解质粒pDKL01)中,诱导表达和裂解,制备rVCG-Pmp18N冻干粉,两批共计获得冻干粉518.90mg；并且进行Western Blot鉴定,结果证明rVCG载体能够很好的递呈Pmp18N蛋白抗原,Pmp18N蛋白在rVCG中能够很好的表达。2不同组方疫苗的免疫效果评价：利用小鼠模型,对亚单位疫苗rPmp18N+CpG+FL、霍乱弧菌载体疫苗rVCG-Pmp18N、以及rVCG-Pmp18N+FL三种不同形式疫苗的免疫效果进行评价,结果发现rVCG-Pmp18N载体疫苗不仅可以刺激机体的体液免疫、细胞免疫、粘膜免疫,产生很好的免疫应答,而且本身具有免疫佐剂的功能,效果比CpG+FL效果之和更好；VCG-Pmp18N额外添加免疫佐剂FL,能够增强VCG递呈抗原的能力,起到更好的免疫保护效果。同时,VCG疫苗生产和运输过程中不需要额外的冷藏条件,加上本身的佐剂特性不需要添加额外佐剂,大大降低了疫苗的生产成本,为该疫苗在兽医领域的大范围临床应用提供了可能性。3. Pmp18N免疫机理的初步研究：利用rPmp18N体外刺激DC细胞,发现rPmp18N能够促进DC细胞成熟,上调表达CD40、CD80、CD86、MHCⅡ分子,同时高表达细胞因子IL-1β、IL-6、 IL-12p70、MCP-1,增强DC细胞的抗原递呈功能,促进T细胞向Thl型免疫应答分化,Thl型免疫应答是衣原体免疫所必须的,这与动物实验T细胞高表达IFN-γ相一致；并且通过进一步研究发现,rPmp18N通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路以及NLRP3/ASC/Caspase-1炎症体的激活活化DC细胞,最终导致DC细胞表型的变化以及递呈功能的增强。