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大肠癌系消化道常见的恶性肿瘤之一,其发生机制较为复杂。研究表明大肠癌的发生与K-ras癌基因突变和P53、APC和DCC等抑癌基因失活有关。但最近研究发现遗传性非息肉病性大肠癌的发生与癌基因和抑癌基因无关,而是由于错配修复基因突变引起微卫星不稳定性所致,随后在散发性大肠癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤中均发现微卫星不稳定性,并认为它是肿瘤发生的又一种新机制。有关大肠癌癌前病变(腺瘤)错配修复基因的表达和微卫星不稳定性的研究,文献报道甚少,同时它们在大肠肿瘤发生发展中的作用和意义以及对细胞增殖、凋亡的影响,目前仍不十分清楚。为此,本研究采用免疫组化、TUNEL、PCR-SSLP方法对人体大肠腺瘤及其癌变和大肠癌,分别进行了错配修复基因hMLH1和hMSH2、PCNA、Ki-67、Bcl-2、Bax表达和细胞凋亡观测,以及D18S34、D17S799、D5S409、TCF-2、Rb和P53 6个位点的微卫星不稳定性检测。旨在探讨错配修复基因hMLH1、hMSH2表达和微卫星不稳定性在大肠肿瘤发生发展中的作用及其相互关系;探讨错配修复基因改变和微卫星不稳定性与大肠腺瘤细胞增殖和凋亡的关系,为进一步了解大肠肿瘤发生机制和早期诊断提供某些帮助。主要结果如下:1.通过对63例大肠腺瘤、20例腺瘤癌变、20例大肠癌和11例正常大肠粘膜错配修复基因hMLH1、hMSH2的表达进行检测结果显示,在腺瘤、腺瘤癌变和大肠癌细胞错配修复基因hMLH1、hMSH2的表达逐渐降低,与正常大肠相比相差显著(p<0.05),随腺瘤不典型增生程度增加,其阳性表达率亦逐级降低。提示DNA错配修复基因突变或功能缺失与大肠癌的发生有关,可能系大肠癌发生过程中的早期事件。其中右半结肠腺瘤、癌变和大肠癌组织hMLH1、hMSH2阳性表达率显著低于左半结肠(p<0.01),提示左半结肠与右半结肠的大肠癌的发生机制有所不同。2.大肠腺瘤癌变和大肠癌中hMSH2-者PCNA LI均值比hMSH2+者低(P<0.05),其中大肠腺瘤不典型增生Ⅱ、Ⅲ级间hMSH2-与hMSH2+组两种均值统计学差异显著(P<0.05);大肠腺瘤、癌变和癌中hMLH1的阳性与阴性表达者间PCNA和Ki-67标记指数值无显著性差异。大肠腺瘤、腺瘤癌变和大肠癌中,hMLH1或hMSH2表达缺失者,其PCNA和Ki-67标记指数较表达阳性者相对降低;腺瘤不典型增生中,hMLH1或hMSH2阴性组PCNA和Ki-67标记指数也较阳性组相对降低。提示DNA<WP=8>错配修复基因突变或功能缺陷可能与大肠肿瘤细胞增殖活性降低相关。3.大肠腺瘤和大肠癌hMLH1-者的AI值较hMLH1+者显著增高(p<0.01);腺瘤不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级组hMLH1-与hMLH1+间AI差异非常显著(P<0.05)。腺瘤hMSH2-者AI值显著高于hMSH2+者(P<0.05),腺瘤不典型增生Ⅰ级、Ⅱ级组hMSH2-较hMSH2+者AI显著增高(P<0.05)。凋亡调控基因Bcl-2表达率与Bax表达强度在hMLH1或hMSH2表达缺失大肠腺瘤、腺瘤癌变和大肠癌较两种蛋白阳性相对降低,并与腺瘤不典型增生分级相关。提示错配修复基因突变或功能缺陷可导致大肠腺瘤、腺瘤癌变和大肠癌细胞凋亡水平增高,并对凋亡调控基因表达有一定影响。4.对36例大肠腺瘤及12例腺瘤癌变MSI检测,结果显示其MSI总阳性率为18.75%(9/48),其中腺瘤阳性率为13.88%(5/36),腺瘤癌变阳性率33.33%(4/12),不典型增生Ⅰ级2例,Ⅱ级1例,Ⅲ级2例。提示MSI可能参与了大肠癌的早期形成,为大肠癌发生的早期事件。5.本实验显示MSI+的大肠腺瘤、腺瘤癌变中hMLH1或hMSH2表达缺失占77.78%(7/9),两种蛋白表达均缺失者占66.67%(6/9),MSI阴性组两种蛋白的缺失率为5.12%(2/39),表明大肠腺瘤及其癌变组织中hMLH1、hMSH2蛋白表达缺失是错配修复基因突变或功能缺陷的表现,可能与MSI发生相关。6.MSI阳性大肠腺瘤及其癌变PCNA和Ki-67标记指数低于MSI阴性组;而MSI阳性大肠腺瘤及其癌变中凋亡指数显著高于阴性组。且调控基因Bcl-2表达率和Bax表达强度也显著低于MSI阴性组。提示MSI阳性大肠肿瘤细胞增殖活性较低,而细胞凋亡水平升高,表明错配修复缺陷和基因组DNA的MSI对大肠肿瘤细胞的增殖和凋亡具有一定的影响,也进一步证实MSI大肠肿瘤的发生机制可能有所不同。