【摘 要】
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黄曲霉毒素B1（aflatoxin,AFB1）由黄曲霉及寄生曲霉等产生,广泛存在于多种农作物中而对饲料造成污染,对动物产生较强的致畸、致癌和致突变作用。为检测AFB1的毒性作用,本研究使用斑马鱼胚胎（AB系和肝脏转基因斑马鱼）作为模式动物,从形态学、组织学、基因（组学）水平及蛋白质水平探讨了AFB1的发育毒性及其作用机制。选取受精4小时（4 hpf）的斑马鱼用于AFB1暴露（对照组,0.05μg/
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黄曲霉毒素B1（aflatoxin,AFB1）由黄曲霉及寄生曲霉等产生,广泛存在于多种农作物中而对饲料造成污染,对动物产生较强的致畸、致癌和致突变作用。为检测AFB1的毒性作用,本研究使用斑马鱼胚胎（AB系和肝脏转基因斑马鱼）作为模式动物,从形态学、组织学、基因（组学）水平及蛋白质水平探讨了AFB1的发育毒性及其作用机制。选取受精4小时（4 hpf）的斑马鱼用于AFB1暴露（对照组,0.05μg/m L,0.075μg/m L和0.1μg/m L）,并在不同发育时间检测各项指标。试验结果表明AFB1可引起肝脏脂肪变性及肝细胞核浓缩。与对照组相比,0.05μg/m L,0.075μg/m L,和0.1μg/m L组的核浓缩数量增高,呈浓度依存性。与之对应,AFB1可造成斑马鱼肝脏面积的低下（抑制生长）,中浓度组和高浓度组较对照组斑马鱼肝脏荧光面积显著降低,呈浓度依存性。通过基因检测发现AFB1引起肝脏发育基因（Hhex和prox1）基因表达量下降,结果表明在24hpf时,Hhex和prox1各浓度组与对照组相比有下降的趋势,但无显著性差异。在48hpf时,Hhex高浓度组和中浓度组与对照组相比有下降的趋势,但无显著性差异,而prox1的基因表达量,与对照组相比,高浓度组的基因表达量显著下降。在72hpf时,检测细胞凋亡相关基因（p53,Bcl-2,Bax）的表达量时发现p53的基因表达量与对照组相比,高浓度组基因表达量显著增高,Bcl-2基因表达量的对照组与高浓度组相比显著下降,Bax基因的表达量与对照组相比显著上升。进一步探讨AFB1在48hpf和72hpf对脂质代谢平衡相关基因（PPAR-α,PPAR-β,PPAR-γ）基因表达量的变化,发现AFB1可诱导斑马鱼脂质代谢紊乱。以上结果说明,AFB1肝脏引起的肝脏面积低下可能是激活细胞凋亡和影响肝脏发育基因表达量所造成的。为进一步探讨不同时期AFB1对斑马鱼胚胎肝损伤的机制,将幼年斑马鱼在48hpf暴露于不同浓度组的（0.025μg/m L、0.05μg/m L和0.075μg/m L）AFB1中,在144hpf结果发现:与对照组相比,高浓度组和中浓度组肝脏组织变性空泡率显著上升。通过Masson和天狼星红组织学染色发现,蓝色胶原纤维生成,且具有浓度依存性（p＜0.001）。高浓度组引起α-平滑肌肌动蛋白蛋白的表达增加,与对照组相比棕色变深。对斑马鱼肝纤维化（Hand-2、Acta-2）和炎症损伤（Tgf-β、SDF）基因的表达量进行检测,结果发现:Acta-2的基因表达量与对照组相比,高浓度组的表达量显著上升。检测Hand-2的基因表达量发现:与对照组相比,中浓度组和高浓度组的基因表达量显著上升。TGF-β的基因表达量发现:与对照组相比,中浓度组和高浓度组的基因表达量显著上升。SDF基因发现:高浓度组和中浓度组的基因表达量较对照组显著上升。本试验表明不同时期暴露AFB1可造成肝脏发育的抑制,肝纤维化的生成,找出相关机制,构建模型,为畜牧业治疗AFB1损害提供高通量药物筛选模型。
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