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目的:近年来特异性免疫治疗被认为是当前哮喘唯一的对因治疗方法,但使用的变应原粗浸液成分复杂,很难进行标准化且在治疗中易导致IgE介导的过敏反应,限制了变应原浸液在临床上的使用。有研究报道,编码屋尘螨Derp2全部基因片段的DNA疫苗能抑制Derp2诱导的小鼠气道过敏性炎症。研究还证实DNA疫苗激发免疫系统的过程与Toll样受体(TLRs)和CpG基序有关,尤其是通过TLR-9的刺激。本实验探讨了Derp2 DNA表位疫苗即删除了与IgE表位相关的氨基酸残基的Derp2 DNA疫苗,是否能抑制屋尘螨Derp2诱发哮喘小鼠模型的气道炎症和对TLR-9表达的影响,并与重组Derp2 DNA疫苗(rDerp2)相比较,为进一步开发新的、有效的和实用的屋尘螨疫苗提供理论基础。方法:采用基因重组技术构建Derp2 DNA表位疫苗。将BALB/c小鼠(8周龄,雌性,20-25克)分为4组:哮喘组,rDerp2组,表位疫苗组和对照组。首先分别用PBS, rDerp2, Derp2 DNA表位疫苗免疫小鼠,然后用重组Derp2变应原和屋尘螨提取液加上氢氧化铝致敏,最后用重组Derp2变应原滴鼻激发。在最后一次激发后进行气道高反应性测定。之后,处死所有小鼠。切取肺用HE染色评估组织的一般形态和细胞浸润情况,用western-blot(免疫印迹)和免疫组化的方法检测肺组织TLR-9的表达。收集外周血用ELISA方法检测Derp2特异性IgE, IgG1和IgG2a0各组数据均用x±s表示,用SPSS10.0进行单因素方差分析,P<0.05者为差异具有显著性。结果:(1)小鼠雾化吸入逐渐增加剂量的乙酰胆碱并收集其Penh值,Penh值与气道高反应呈正相关。结果显示对照组的Penh值或气道高反应性随乙酰胆碱浓度的增加并没有发生变化,哮喘组的Penh值比表位疫苗组高,有显著性差异(P<0.01),即表现出高的气道反应性,而且rDerp2组的Penh值也比表位疫苗组的Penh值高。(2)肺组织学检测,哮喘组与表位疫苗组相比,表位疫苗组能有效抑制中央支气管,肺泡和肺血管周围的炎性细胞,而且rDerp2组的炎症浸润比表位疫苗组严重。(3)免疫组化结果显示,TLR-9在气道和肺泡位置上表达。表位疫苗组的TLR-9的表达比其他三组显著增高,免疫印迹实验结果也证实了这一点。(4)用ELISA法检测过敏原Derp2特异性IgE, IgG1和IgG2a的水平。表位疫苗免疫小鼠血清中Derp2特异性IgE及IgG1水平明显降低,与rDerp2组和哮喘组相比有显著差异(P<0.01),同时表位疫苗免疫小鼠血清中Derp2特异性IgG2a明显增加,与对照组和哮喘组相比有显著差异(P<0.01)。结论:Derp2 DNA表位疫苗能诱导偏移Th1的免疫反应,并抑制IgE的产生,它还能增加过敏性哮喘小鼠模型中TLR-9的表达。我们的研究为过敏性哮喘领域的DNA疫苗的发展提供了新思路和方法。