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目的:对广西匙羹藤Gymnemasylvestre(Retz.)Schult茎活性成分牛弥菜醇A的提取分离及药理作用进行系统研究。为促进匙羹藤药材资源的合理开发利用提供科学依据。
方法:对匙羹藤茎进行醇提和部位分离后,得到结晶,采用重结晶法进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据(UV、IR、EA、FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR等)及文献对照法,确定单体化合物;通过生化检测、组织化学、组织免疫法研究方法,观察牛弥菜醇A对正常小白鼠、四氧嘧啶性糖尿病小白鼠、肾上腺素性糖尿病小白鼠、正常小白鼠的糖耐量、四氧嘧啶性糖尿病大鼠的降糖作用,给药14d后,观察小白鼠和大鼠的体重变化,采用酶法、放射免疫分析法测定空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(INS)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、血清总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子(TNF)水平;取肝脏测定肝糖原含量;对胰腺做病理切片观察其形态学改变,并计算胸腺、胰腺、脾脏的重量指数。
结果:(1)通过理化性质和光谱数据确定单体化合物结构为牛弥菜醇A。(2)降糖作用初步研究:实验数据显示,①牛弥菜醇A各剂量组能显著降低西氧嘧啶性糖尿病小白鼠血糖值(p<0.01)。②牛弥菜醇A在较高剂量时对正常小白鼠的血糖和体重有一定的影响(p<0.05)。③牛弥菜醇A对肾上腺素性糖尿病小白鼠有降血糖的作用(p<0.01)。④牛弥菜醇A能够增强正常小白鼠的葡萄糖耐受能力,耐受时间在1h左右。⑤MTD试验测定显示,牛弥菜醇A小白鼠灌胃给药的最大耐受量(MTD)大于750mg/kg体重,相当于临床成人拟用日剂量的430.29倍。(3)降糖作用的机制研究:①四氧嘧啶性糖尿病大鼠给药14d后,牛弥菜醇A(高、中剂量组)血糖值明显低于模型组,且差异有显著性意义(p<0.01);②与糖尿病模型组相比,高、中剂量组大鼠的血清SOD活性和INS水平明显增加(p<0.05),血清MDA含量、TG、TC和TNF水平明显降低(p<0.05),肝糖原含量明显提高(p<0.05);③明显升高胸腺、胰腺、脾脏的重量指数,与模型组比较,差别有显著性意义(p<0.01或0.05),对抗四氧嘧啶引起的胸腺、胰腺、脾脏萎缩。④病理学观察发现,牛弥菜醇A各剂量组胰岛β细胞形态、结构与模型对照组比较,有不同程度的改善,但低剂量组仍有少数细胞肿胀及变性,胰岛β细胞数均明显多于模型组。
结论:(1)通过醇提和部位的分离后,牛弥菜醇A提取得率为0.42%。(2)牛弥菜醇A对正常小白鼠的血糖和体重无明显的影响,(3)牛弥菜醇A能降低高血糖小白鼠的血糖水平,提高正常小白鼠的糖耐量。(4)牛弥菜醇A能降低高血糖大鼠血糖水平和TNF的表达,表明牛弥菜醇A可能具有促进胰岛组织修复和恢复其分泌的功能。(5)牛弥菜醇A可提高高血糖大鼠血清SOD活性、肝糖原含量和降低血清MDA、TG、CHO水平,提示牛弥菜醇A具有调节血脂、清除自由基、提高机体抗氧化能力和增强免疫功能的作用。(6)牛弥菜醇A能提高肝糖原的含量,表明牛弥菜醇A具有促进肝组织糖原合成功能。