普伐他汀对大型溞毒性效应及其作用机制研究

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到目前为止,他汀类药物在治疗心血管疾病中的重要性愈发突出。此外,在部分地表水和污水处理厂的排放水中常能检测到他汀类药物的存在。这使得水生生态系统的生物面临生存的窘境,可能进一步造成生物存在潜在和持久的危害。因此,他汀类药物对环境生物的作用机制亟待解决。而普伐他汀(PRA)是一种常见治疗心血管的他汀类药物,在临床治疗过程中的使用量很大。大型溞作为典型的水生无脊椎动物,对食物链的结构稳定有重要意义,并且自身也对毒物有高敏感性,被用来作为受试对象。而本研究首先观测了在干净无污染的条件下大型溞连续21天的生长状况;其次,根据OECD 202导则,通过进行PRA对大型溞的48小时急性毒性实验,得到EC50值后为下一步研究提供基础;然后在宏观层面探究了不同浓度PRA对大型溞在21天内生理情况的影响;此外,通过转录组学技术,从基因层面探究了PRA对大型溞分子层面的影响。最后,进行多代实验探究了PRA在大型溞代际方面的毒性。本论文的研究成果如下:(1)本研究不仅观测了自然条件下大型溞在连续21天培养内的各项生理指标,包括体长每天的变化,蜕皮次数、生殖次数、个体每窝繁殖数量以及个体总繁殖数量;而且评估了大型溞对PRA的毒性敏感性。大型溞暴露于不同浓度的PRA 48小时后,根据受抑制的数量计算PRA对大型溞的EC50值,本研究中测定的PRA 48小时EC50值为9.03 mg/L,95%置信区间为8.37 mg/L至9.82 mg/L。(2)本研究通过表型分析,探究了浓度梯度为0、0.5、50、5000μg/L的PRA对模式大型溞连续21天内的毒性作用。在暴露21天后,所有PRA处理组中的大型溞体长均显著性减少,尤为突出的是高PRA处理组下大型溞的体长减少最明显。其次,高PRA处理组的大型溞的后代数量增多,基本每窝的数量都高于对照组的窝数数量。最后每个PRA处理组下大型溞的蜕皮数有轻微的增长但是没有显著性差异。(3)本研究基于转录学技术,解析了不同浓度的PRA(0.5μg/L、50μg/L和5000μg/L)对大型溞分子层面的影响。在实验21天后,5000μg/L的PRA暴露下大型溞其表型特征中的生长受到抑制而繁殖能力增强。在0.5μg/L、50μg/L和5000μg/L的PRA处理组中,分别鉴定了76个(52个上调,24个下调)、167个(45个上调,122个下调)和499个(226个上调,273个下调)差异表达基因。5000μg/L的PRA上调了与昆虫激素生物合成通路相关的基因methyl farnesoate epoxidase(cyp15a1_c1),从而促进大型溞增加后代新生儿的数量。0.5μg/L、50μg/L和5000μg/L的PRA上调了与昆虫激素生物合成的通路的基因juvenile hormone-III synthase(jhamt),进而抑制了大型溞的体长。此外,外源性代谢途径和能量代谢途径暴露于PRA后也同样显著出现(p<0.05),表明能量分配对大型溞的正常生长与繁殖有指导作用。(4)本研究将F0代大型溞暴露于PRA(0、0.5μg/L、50μg/L和5000μg/L)后以生理指标为评判标准,研究了PRA对其后三代的毒性作用。试验结果发现,在F1、F2和F3代中试验组的大型溞体长仍然被抑制;到F3代时的21天后,高浓度恢复组中大型溞体长抑制的百分比减小。同时在F0代和F1代的高试验组中大型溞的后代新生儿数量仍然高于对照组,但在F2代和F3代时却与之相反,高浓度恢复组的大型溞后代新生儿数量低于对照组。此外,PRA胁迫下的大型溞使得其在F1和F2代出现红色,以上表型结果可说明PRA对大型溞的代际可能造成不可忽视的危害。
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