【摘 要】
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目的:通过检测CDR1AS、miRNA-432-5p、SOX9在压力造模的退变髓核细胞（NP）及正常髓核细胞表达量的不同,比较退变髓核细胞及正常髓核细胞差异性表达区别。通过过表达（OE）及干扰（si）三者表达量,判断三者之间的关系、作用机制及三者对于缓解椎间盘退变的意义。同时通过检测退变髓核细胞及正常髓核细胞分泌的外泌体中CDR1AS含量,分析不同外泌体对抑制椎间盘退变的可能性。方法:通过过往实验
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（No.81772391）；
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目的:通过检测CDR1AS、miRNA-432-5p、SOX9在压力造模的退变髓核细胞（NP）及正常髓核细胞表达量的不同,比较退变髓核细胞及正常髓核细胞差异性表达区别。通过过表达（OE）及干扰（si）三者表达量,判断三者之间的关系、作用机制及三者对于缓解椎间盘退变的意义。同时通过检测退变髓核细胞及正常髓核细胞分泌的外泌体中CDR1AS含量,分析不同外泌体对抑制椎间盘退变的可能性。方法:通过过往实验中对退变髓核细胞及正常髓核细胞中circ RNA表达差异的分析以及对专业circ RNA、miRNA网站数据交叉对比,筛选出CDR1AS、miRNA-432-5p可能存在表观遗传学层面联系。体外使用压力条件制作髓核细胞退变模型,获取压力诱导的退变髓核细胞与正常髓核细胞对比,通过q PCR分析两种状态髓核细胞中CDR1AS和miRNA-432-5p表达量差异,以及两者分泌的外泌体中CDR1AS和miRNA-432-5p表达量的不同;通过蛋白免疫印记（Western blot）检测两种状态髓核细胞中SOX9、agg、bcl2、col2、bax2等蛋白表达量差异,分析CDR1AS、miRNA-432-5p、SOX9对椎间盘退变影响。流式细胞分析实验分析三者对髓核细胞凋亡影响。而双荧光素酶实验测定了CDR1AS、miRNA-432-5p、SOX9是否有直接联系。通关免疫荧光验证MMP-13的表达水平与髓核细胞退变相关性。结果:与正常髓核细胞相比,CDR1AS、SOX9表达量在退变髓核细胞中显著降低,miRNA-432-5p表达量在退变髓核细胞中显著增多。在过表达实验中,CDR1AS的过表达使得miRNA-432-5p表达水平显著下降,SOX9表达水平显著上升,细胞凋亡率显著降低,细胞外基质（ECM）分解明显减少,有效缓解髓核细胞退变。此外,当miRNA-432-5p过表达时,SOX9表达水平显著下降,髓核细胞退变加重。同时,双荧光素酶实验证实CDR1AS、miRNA-432-5p存在直接表观遗传学联系,CDR1AS能通过miRNA-432-5p间接调控SOX9,并最终实现对髓核细胞退变的调控作用。通过对外泌体内容物分析,证实退变细胞外泌体中CDR1AS含量明显减少。结论:CDR1AS能够通过下调miRNA-432-5p,增加SOX9表达,抑制椎间盘退变,缓解髓核细胞凋亡、抑制细胞外基质降解。“工程化”源自正常髓核细胞的富含CDR1AS的外泌体具有抑制椎间盘退变可能性。
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