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背景多囊卵巢综合征（Polycystic ovarian syndrome,PCOS）是由于雄激素分泌增多,导致卵巢呈现多囊样改变的疾病,是一种生育年龄女性常见的生殖内分泌紊乱和代谢异常综合征。其严重影响全球患病女性的生理和心理健康,降低她们的生活质量。主要临床表现为月经失调和卵巢多囊样化,继而引起不孕、胰岛素抵抗等一系列症状,并会增加患者不良妊娠结局的风险。无排卵和排卵障碍是女性不孕的病因之一,PCOS会导致患者稀发排卵甚至无排卵,造起女性不孕症。PCOS患者卵泡发育的异常主要表现为窦卵泡过多募集于卵巢皮质并且发育停滞,导致无优势卵泡的发生及排出,其排卵障碍的机制目前尚不清楚。文献研究表明PCOS患者卵泡发育异常与卵巢颗粒细胞异常的凋亡密切相关,然而其潜在的机制尚不明确。内质网途径引起的细胞凋亡是机体调控细胞程序性死亡的主要通路之一。人体各组织正常的细胞在遭受内或外因素过度刺激时,引起蛋白质加工工厂-内质网的功能障碍,影响了正确的蛋白质的合成或转运。蛋白质稳态是细胞功能的重要过程,内质网作为最大的细胞器之一,其功能障碍会导致大量的异常的折叠蛋白质或未折叠蛋白质聚积在内质网内,引起内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）。细胞为修复损伤、恢复稳态将启动细胞内的未折叠蛋白质反应（Unfolded Protein Reaction,UPR）通路。激活UPR在很大程度上缓解了细胞的功能障碍。X-盒结合蛋白 1（X-box binding protein 1,XBP1）是CREB/ATF家族中的主要转录因子之一,其定位于细胞核,基因定位于22q12。胚胎时期,XBP1主要在外分泌腺体、肝脏和成骨细胞中表达,其参与胚胎发育,在成人组织中则广泛存在,表达于人体组织各发育阶段。XBP1是碱性亮氨酸拉链结构蛋白,生理状态下,以非活性XBP1（XBP1 unspliced,XBP1u）的形式存在。当细胞发生内质网应激时,XBP1u被剪切为为活性XBP1（XBP1 spliced,XBP1s）,其作为转录因子进入细胞核内,有效的作用于细胞核内多个靶基因,以调控蛋白质修饰、折叠或通过内质网相关蛋白降解途径（ER-associated protein degradation,ERAD）降解错误的蛋白,并进一步促进内质网应激修复基因的表达来恢复细胞内环境稳态。XBP1调控细胞增殖分化、凋亡自噬及氧化应激等,参与人体多种正常生理活动。本课题前期研究发现PCOS患者颗粒细胞中XBP1高表达,但其在PCOS的发生发展中起到什么作用尚未见报道。因此,本研究拟探索人卵巢颗粒细胞中XBP1的表达与细胞凋亡的相关性,探索XBP1对PCOS患者颗粒细胞凋亡的可能作用,可为PCOS的诊治提供新的思路。目的1.对比单纯输卵管因素不孕患者与多囊卵巢综合征患者颗粒细胞凋亡情况差异,检测未折叠蛋白分子XBP1、内质网相关促凋分子CHOP和凋亡调控分子BAX、BCL-2、Caspase-3 的表达;2.探索PCOS患者颗粒细胞XBP1的表达对细胞增殖和凋亡的调控作用。材料与方法本研究纳入对照组及PCOS患者组共30例作为研究对象,对比两组细胞凋亡情况,并检测两组卵巢颗粒细胞中未折叠蛋白反应分子XBP1与凋亡调控分子BAX、BCL-2、Caspase-3及内质网相关促凋分子CHOP的表达水平差异。选用卵巢颗粒细胞瘤细胞KGN细胞株作为实验载体研究PCOS患者卵巢颗粒细胞中XBP1对内质网相关促凋分子及凋亡相关分子的影响。使用小干扰 RNA（Small interfering RNA,siRNA）技术在 KGN 细胞中下调XBP1 的表达,对比凋亡相关因子及内质网相关促凋分子的信使RNA（mRNA）及蛋白相对表达量的差异。结果1.用实时荧光定量（Real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测 PCOS 患者卵巢颗粒细胞mRNA的表达,结果显示:在PCOS组患者颗粒细胞中mRNA的表达量,未折叠蛋白分子XBP1显著高于对照组（P＜0.05）;内质网相关促凋因子CHOP显著高于对照组（P＜0.05）;促凋亡因子BAX、Caspase-3显著高于对照组（P＜0.05）:PCOS患者组抑凋亡因子BCL-2 mRNA表达量低于对照组（P＜0.05）。蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测颗粒细胞内蛋白的表达:在PCOS患者组颗粒细胞中XBP1、CHOP、BAX、Caspase-3高于对照组,BCL-2的蛋白表达量低于对照组。半定量分析结果显示:XBP1的蛋白表达量显著高于对照组（P＜0.05）;CHOP的蛋白表达量显著高于对照组（P＜0.05）;BAX、Caspase-3的蛋白表达量显著高于对照组（P＜0.05）;PCOS患者组BCL-2蛋白表达量低于对照组（P＜0.05）。PCOS患者组颗粒细胞的细胞凋亡率显著高于对照组（P＜0.05）。2.在KGN细胞中下调XBP1后,使用RT-qPCR检测处理后KGN细胞内XBP1、CHOP、BAX、BCL-2、Caspase-3 的mRNA的表达。在si-XBP1 组中,BAX、BCL-2、Caspase-3的mRNA的表达量显著低于NC对照组（P＜0.05）,CHOP的mRNA的表达量高于NC对照组,差异无统计学意义。下调XBP1后WB检测KGN细胞内蛋白的表达:下调XBP1组中,BAX、BCL-2、Caspase-3的蛋白的表达量显著低于NC对照组（P＜0.05）,CHOP的蛋白表达量高于NC对照组。3.在KGN细胞中,si-XBP1组细胞凋亡率高于NC组,差异无统计学意义（P＞0.05）;si-XBP1组细胞CCK-8增殖实验与NC组相比,增殖率显著高于NC组（P＜0.05）。结论1.与单纯因输卵管因素不孕患者相比,未折叠蛋白分子XBP1在PCOS患者卵巢颗粒细胞高表达,提示XBP1可能参与PCOS患者卵巢颗粒细胞的异常凋亡。2.抑制XBP1在KGN细胞中的表达,可以上调内质网相关促凋分子CHOP,下调BCL-2等相关凋亡调控基因的表达调控颗粒细胞的凋亡;敲低XBP1,KGN细胞的增殖能力明显增强。