As2O3/Fe3O4复合纳米粒的制备与生物相容性评价及其热化疗治疗宫颈癌的研究

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[目的]①研究Fe3O4磁性纳米粒及As2O3/Fe3O4复合纳米粒的制备及表征;②Fe3O4磁性纳米粒及As2O3/Fe3O4复合纳米粒热动力学检测;③Fe3O4磁性纳米粒及As2O3/Fe3O4复合纳米粒生物相容性评价;④As2O3/Fe3O4复合纳米粒热化疗对培养人宫颈癌Hela细胞治疗作用的研究;⑤As2O3/Fe3O4复合纳米粒热化疗治疗异种移植性宫颈癌的研究;⑥As2O3/Fe3O4复合纳米粒热化疗抑制宫颈癌转移相关基因表达的研究。[方法]①采用化学共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒,采用浸渍法制备As2O3/Fe3O4复合纳米粒,运用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、X射线衍射分析(x-ray diffraction,XRD)、扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)、能谱仪(energy dispersive spectrometer, EDS)及图象分析等技术进行特性研究;②在交变磁场(alternating magnetic field,AMF)作用下观察不同浓度的Fe3O4及As2O3/Fe3O4纳米磁流体的体外升温情况;③采用MTT实验、溶血试验、微核试验、小鼠LD50 (median lethal dose)检测等方法评价Fe3O4磁性纳米粒及As2O3/Fe3O4复合纳米粒的生物相容性;④通过倒置显微镜、电子显微镜、MTT (methyl thiazolyl tetrazolium)实验、流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测,评价As2O3/Fe3O4复合纳米粒热化疗对体外培养人宫颈癌Hela细胞的治疗作用;⑤将As2O3/Fe3O4复合纳米粒注入到裸鼠人宫颈癌移植瘤中,经AMF作用3次,6w后测肿瘤质量抑制率及体积抑制率,通过HE切片组织学检查观察治疗后肿瘤组织的形态改变。⑥采用RT-PCR检测人宫颈癌Hela细胞经As2O3/Fe3O4复合纳米粒热化疗后CD44v6、VEGF-C、及MMP-9的表达情况,初步探讨As2O3/ Fe3O4复合纳米粒热化疗的抗肿瘤转移机制。[结果]①制备的Fe3O4磁性纳米粒表征:TEM检测显示Fe3O4磁性纳米粒为圆形、电子密度高、大小较一致、分散良好;图像分析仪粒径统计学分析其平均粒径约为20nm;EDS证实制备的Fe3O4磁性纳米粒只含有Fe与O两种元素;XRD显示制备的纳米粒子各衍射峰所对应的面间距(d值)与粉末衍射标准联合会(JCPDS)编制的代表物质为尖晶石型磁性Fe3O4的PDF(Powder Diffraction File)卡片d值吻合一致。②制备的As2O3/Fe3O4复合纳米粒表征:TEM检测显示为圆形、分散良好;图像分析仪粒径统计学分析其平均粒径约为50nm;EDS证实制备的纳米材料含有As、Fe及O三种元素。③体外升温试验:在输出电流20A,输出频率230kHz的AMF作用下不同浓度的Fe3O4磁性纳米粒及As2O3/ Fe3O4复合纳米粒混悬液能升温到42℃~65℃,且加热40min后温度能恒定在某一水平不发生改变。④L-929细胞MTT实验、溶血试验、微核实验证实Fe3O4磁性纳米粒无溶血作用、毒性低及无致畸致突变作用、符合生物材料的安全性要求,As2O3/Fe3O4复合纳米粒亦无溶血作用、无致畸致突变作用;小鼠LD50检测发现Fe3O4磁性纳米粒LD50为7.57g/kg,As2O3/Fe3O4复合纳米粒LD50为
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