蜜蜂球囊菌几丁质酶的纯化及其多克隆抗体的制备

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蜜蜂白垩病(bee chalkbrood disease)是由蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis Olive&Spiltoir)引起的蜜蜂幼虫的真菌传染病。白垩病是我国养蜂业中的主要病害之一,影响着我国养蜂业的发展。目前国内外对蜜蜂球囊菌的研究主要集中在病原的生物学特性、最适培养条件、发病流行规律、病理学、病情的诊断等方面,由于蜜蜂球囊菌的致病机理不明,不能在生产中有效的预防和治疗蜜蜂白垩病。昆虫的体壁和中肠围食膜均含有几丁质;昆虫中肠围食膜主要由蛋白质、几丁质和糖类等组成,是昆虫防止病原入侵的一道天然屏障。几丁质酶因具有破坏围食膜和扰乱昆虫的生长发育的作用而被人们关注。在试验中,本文作者对ND-2蜜蜂球囊菌几丁质酶进行了诱导、分离、纯化及其多克隆抗体制备的研究。经过85%硫酸铵盐析;4℃10000 r·min-130 min离心;透析袋透析;DNS法酶活测定及SDS-PAGE电泳和切胶回收纯化,本文作者得到了单一的纯化几丁质酶,并测定其分子量约为71.71 kDa。用制备好的几丁质酶液免疫新西兰大白兔,ELISA检测抗体效价达1∶256 000;Western Blot印记检测证明抗体具有良好的特异性。
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