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目的:探讨穴位电刺激对胫骨骨折内固定术后小鼠学习记忆能力、海马内α7nAChR表达情况、小胶质细胞亚型变化及大脑炎症反应的影响。方法:该研究以SPF级6月龄C57BL/6雄性小鼠为实验对象,体重(30±5)g,共计95只,按数字表法随机分为对照组、单纯胫骨骨折模型组(模型组)、穴位电刺激+胫骨骨折模型组(电针组)、α7nAChR激动剂PNU282987+胫骨骨折模型组(PNU组)及穴位电刺激+α7nAChR拮抗剂MLA+胫骨骨折模型组(MLA+电针组),每组各19只。对照组除每日水迷宫定位巡航实验外不施加其他处理;其余各组在水迷宫定位巡航五日后做右后肢胫骨骨折内固定术;电针组于术后给予七天的穴位电刺激;PNU组于术后给予七天的α7nAChR激动剂;MLA+电针组于术后给予七天的穴位电刺激,同时给与α7nAChR拮抗剂。整个实验采用定位巡航实验和空间探索实验评估小鼠认知功能,各组于术前1d,术后1d、3d、7d这四个时间点随机脱颈处死小鼠,每个时间点各组处死3只,术后7d各组额外再处死7只。断头后取出小鼠海马,采用酶联免疫吸附试验法检测小鼠海马内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)等细胞因子水平,采用流式细胞术检测术后7d海马内小胶质细胞分型情况,采用免疫荧光法(ELISA)检测术后第7d小鼠大脑海马内α7nAChR表达情况。结果:1.一般情况:1)整个实验周期过程中小鼠情况:12小时明暗交替环境,温度湿度适宜,各组小鼠发育良好,体重无明显变化,饲养期间无打斗撕咬情况发生。2)胫骨骨折内固定模型建立,术中小鼠麻醉诱导平稳、创口小且失血量少、术中采取保温措施;术后小鼠苏醒好、活动不受限、整体情况良好。2.Morris水迷宫实验结果:1)适应性训练:将95只小鼠逐只放入水迷宫中,剔除不具有游泳能力,视力有缺陷,水中假死不运动的小鼠,并用合格的备用鼠代替。2)定位巡航实验:建模前经过为期5天的定位巡航实验,各组小鼠的游泳路线由最初的贴壁游动转为有目的的朝平台方向的直线游动,随着训练天数的逐渐增多,各组小鼠已能较快找到水迷宫中的平台,逃避潜伏期逐渐变短,在训练进行到第4日时,各组小鼠逃避潜伏期的数据经统计学比较分析后,无明显差异。这说明各组小鼠在经过适应性训练后对水迷宫中的平台位置有了较深的记忆。建模后分别选择术后1d,3d和7d三个时间点观测各组小鼠的逃避潜伏期,结果发现:与对照组相比,其余各组在建立胫骨骨折内固定术后逃避潜伏期均明显延长,且有统计学意义。3)空间探索实验:建模后于各个时间点撤去平台测定各组小鼠的穿越平台次数,空间探索试验每次于定位巡航实验开始前2小时进行。结果发现:与对照组相比,其余各组在术后穿越平台次数均明显减少,无目的贴壁运动多见,且有统计学意义。3.ELISA结果回报:本研究于术前1d,术后1d、3d和7d各组随机处死3只小鼠并测定小鼠海马内各细胞因子的含量,所测定的细胞因子包括IL-1β、IL-4、IL-10、TNF-α。各指标结果:术前各组小鼠海马内所测四种细胞因子含量差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,术后1d其余各组IL-1β、TNF-α含量明显增高(P<0.05);术后3d模型组和MLA+电针组IL-1β、TNF-α含量无明显变化(P<0.05),电针组,PNU组IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量增高(P<0.05);术后7d模型组IL-1β、TNF-α含量仍高于对照组,具有统计学意义(P<0.05),电针组,PNU组和MLA+电针组IL-1β、TNF-α含量降低(P>0.05)。与模型组相比,术后1d电针组,PNU组IL-1β、TNF-α含量增高且有统计学意义(P<0.05),而MLA+电针组IL-1β、TNF-α含量增高无统计学意义(P>0.05),术后3d电针组,PNU组IL-1β、TNF-α含量无明显变化(P<0.05),IL-4、IL-10含量增高(P<0.05),MLA+电针组IL-1β、TNF-α含量无明显变化(P>0.05),IL-4、IL-10含量增高(P<0.05),术后7d电针组,PNU组IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05),IL-4、IL-10含量增高(P<0.05),MLA+电针组IL-1β、TNF-α含量减少但无统计学意义(P>0.05),IL-4、IL-10含量增高(P<0.05)。4.流式细胞术结果回报:本研究于术后7d各组随机处死4只小鼠,采用流式细胞术测定小鼠海马内小胶质细胞表面CD206,CD86来确定其海马内小胶质细胞M1,M2亚型的含量。对照组小鼠未行胫骨骨折内固定术,其海马内小胶质细胞以静息态多见。模型组与MLA+电针组小鼠海马内M1、M2型小胶质细胞含量增多,M1型含量远远高于M2型。电针组与PNU组小鼠海马内M1、M2型小胶质细胞含量增多,M2型含量远远高于M1型。5.免疫荧光染色结果回报:本研究于术后7d各组随机处死3只小鼠,采用免疫荧光染色法测定小鼠海马内小胶质细胞表面α7nAChR的含量。通过对IOD及面密度的统计学分析,结果显示:与对照组相比,模型组小鼠海马内小胶质细胞表面α7nAChR的含量明显降低,电针组、PNU组与MLA+电针组小鼠海马内小胶质细胞表面α7nAChR的含量明显升高,且电针组与PNU组α7nAChR的含量升高显著,与MLA+电针组相比有统计学意义。而PNU组与电针组相比,PNU组小鼠海马内小胶质细胞表面α7nAChR的含量更高,两组之间有统计学意义。结论:1.胫骨骨折内固定术后小鼠会出现学习记忆能力下降,并且这种学习记忆能力的降低和海马内α7nAChR含量,抗炎因子(IL-4、IL-10)的降低呈正相关,与促炎因子(IL-1β、TNF-α)呈负相关。2.电针刺激可以改善胫骨骨折内固定模型小鼠的学习和记忆能力,且其机制可能通过降低模型小鼠海马内的炎性因子来实现的。3.电针刺激可改变模型小鼠海马内小胶质细胞M1/M2比例,其可能是调节海马内抗炎因子与促炎因子含量的关键环节。4.小胶质细胞M1/M2比例的变化可能与α7nAChR的活化有关,且电针刺激发挥与α7nAChR激动剂相似的作用。