【摘 要】
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目的：翘母驱感滴丸是由贯叶连翘、知母等中药组成的中药复方制剂，主要功效为清热解毒透表，主要用于治疗热疫病毒侵入人体所致的中医“时行感冒”，现代医学所称的流行性感冒，属于此范畴，可按本病证辨证治疗。本课题通过体外细胞培养实验，首先研究翘母驱感滴丸的细胞毒性，筛选出体外抗流感病毒的剂量范围；其次通过体外抗流感病毒作用，研究翘母驱感滴丸对人流感病毒H1N1、H3N2的抑制作用，并计算其治疗指数。通过昆明
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目的：
翘母驱感滴丸是由贯叶连翘、知母等中药组成的中药复方制剂，主要功效为清热解毒透表，主要用于治疗热疫病毒侵入人体所致的中医“时行感冒”，现代医学所称的流行性感冒，属于此范畴，可按本病证辨证治疗。本课题通过体外细胞培养实验，首先研究翘母驱感滴丸的细胞毒性，筛选出体外抗流感病毒的剂量范围；其次通过体外抗流感病毒作用，研究翘母驱感滴丸对人流感病毒H1N1、H3N2的抑制作用，并计算其治疗指数。通过昆明种小鼠体内实验，研究了翘母驱感滴丸的急性毒性作用及对鼠肺适应株FM1病毒的抑制作用，评价其治疗热疫病毒侵入人体所致的中医“时行感冒”的安全性及药效基础，以指导临床用药。
方法：
1、翘母驱感滴丸体外抗流感病毒实验：
以狗肾上皮细胞(MDCK)为切入点，选用甲型人流感病毒株H1N1、H3N2感染细胞。翘母驱感滴丸分为4个剂量组，设细胞对照组、病毒对照组、金刚烷胺4个浓度阳性对照组，采用细胞培养技术和结晶紫染色法、MTT染色法观察翘母驱感滴丸对人流感病毒株H1N1、H3N2感染的宿主细胞活性的影响。
2、翘母驱感滴丸的急性毒性实验：
实验选用昆明种小鼠12只，随机分为给药组和生理盐水组，灌胃给药，药物浓度为小鼠可承受最大剂量的最大溶解浓度，连续3次给药，每2小时一次，观察2周，测翘母驱感滴丸的LD50。未能测出LD50时，则重新选取小鼠20只随机分为给药组和生理盐水组，给药方式及给药量同前，观察2周，记录各组动物体重、症状、体征等指标。
3、翘母驱感滴丸对流感病毒FM1感染小鼠的保护作用：
实验选用昆明种小鼠，随机分为八组：正常对照组、病毒对照组、翘母驱感滴丸大、中、小剂量组、金刚烷胺大、中、小剂量组，FM1病毒感染小鼠后，灌胃给药，观察翘母驱感滴丸对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护作用，以及肺指数和肺组织病理形态学变化。
4、翘母驱感滴丸对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤修复机制的研究：
实验选用昆明种小鼠，随机分为八组：正常对照组、病毒对照组、翘母驱感滴丸大、中、小剂量组，金刚烷胺大、中、小剂量组。FM1病毒感染小鼠后，灌胃给药，采用ELISA试剂盒检测肺匀浆中细胞因子IL-1及TNF-α含量，采用流式细胞仪检测法测定外周血中T细胞亚群CD4+、CD8+的数量。
结果：
1、翘母驱感滴丸体外抗流感病毒实验：
翘母驱感滴丸各剂量组作用于经H1N1、H3N2病毒感染的MDCK细胞后，病变效应减低，试验孔中的活细胞相对量增加，其中，翘母驱感滴丸0.25g/L组的OD值增加最高。经计算治疗指数，翘母驱感滴丸对H1N1、H3N2流感病毒的治疗指数分别为：14.46、10.32，均明显高于金刚烷胺的治疗指数(分别为：7.95、7.44)。
2、翘母驱感滴丸的急性毒性实验：
通过灌胃给药无法测出翘母驱感滴丸的LD50，以小鼠每天最大给药量为16g/kg折合计算，为成人临床日用量的583倍，灌胃给药后，动物活动自如，反应如常，观察期间小鼠毛发生长正常，呼吸均匀，皮肤光泽度好，摄食、摄水正常，大、小便正常，14d内小鼠体质量增加，由试验前20.13±0.67g增加到32.52±1.64g。48h内动物无死亡，2周后全部动物均健康存活，主要脏器均未见异常改变。
3、翘母驱感滴丸对流感病毒FM1感染小鼠的保护作用：
翘母驱感滴丸250mg/kg、500mg/kg组对感染FM1小鼠死亡保护率为55.56％，与病毒对照组比较，差异显著(P<0.05)，与阳性对照金刚烷胺各剂量组死亡保护率比较，无显著差异(P>0.05)。翘母驱感滴丸各组小鼠的肺指数明显降低，与模型组相比差异显著(P<0.05)，其中翘母驱感滴丸500mg/kg组小鼠肺指数最低，与金刚烷胺100mg/kg组肺指数相当(P>0.05)；肺组织病理形态学观察可见，翘母驱感滴丸各组与模型组比较，小鼠肺脏组织结构较完整，肺泡间隔基本接近正常，炎性细胞浸润减少。
4、翘母驱感滴丸对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤修复机制的研究：
翘母驱感滴丸各组小鼠肺匀浆中细胞因子IL-1及TNF-α含量与病毒对照组比较，有明显降低(P<0.05)，翘母驱感滴丸500mg/kg组小鼠的IL-1及TNF-α含量最低；翘母驱感滴丸各组小鼠外周血中CD4+含量及CD4+/CD8+比值与病毒对照组比较，有明显降低(P<0.05)，而CD8+含量与病毒对照组比较，则明显升高(P<0.05)。
结论：
1、翘母驱感滴丸体外抗流感病毒实验：
翘母驱感滴丸能抑制H1N1、H3N2流感病毒进入细胞复制增殖，有明显的抗H1N1、H3N2流感病毒作用。翘母驱感滴丸对H1N1、H3N2流感病毒的治疗指数均明显高于金刚烷胺，表明：翘母驱感滴丸的安全性高于金刚烷胺。
2、翘母驱感滴丸的急性毒性实验：
以每日最大给药量16g/kg给小鼠灌胃给药翘母驱感滴丸，相当于生药125g/kg，为成人临床用药量的583倍，远超过成人临床日用量的100倍，未出现死亡及中毒症状，证明翘母驱感滴丸临床应用安全。
3、翘母驱感滴丸对流感病毒FM1感染小鼠的保护作用：
实验发现：翘母驱感滴丸可明显降低小鼠死亡率和肺指数，改善小鼠肺部炎症反应，表明翘母驱感滴丸对流感病毒FM1感染小鼠具有明显的保护作用。
4、翘母驱感滴丸对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤修复机制的研究：
翘母驱感滴丸可通过减少促炎因子IL-1、TNF-α含量和调节小鼠机体免疫功能等途径，从而减轻肺组织炎性损伤，降低肺指数，改善肺脏病理变化，对感染FM1小鼠肺脏有保护作用。
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