近年来养猪业高速发展的同时也面临着多种疫病的威胁,而腹泻性疾病则是其中最大的威胁之一,频发的腹泻疾病给养猪业造成了巨大的经济损失。猪萨佩罗病毒（Porcine Sapelovirus,PSV）作为一种检出率较高的肠道病毒,感染后可引起的腹泻、肺炎、脑脊髓炎等疾病,会严重影响仔猪的健康生长。PSV的亚临床感染或隐性感染只引起轻微的组织损伤甚至不引起损伤,在临床上易被忽略,因而造成PSV感染扩散,致使防控难度加大。目前PSV广泛存在于国内规模化猪场中,在我国华南、华东、华北、西南等地猪场均有检出,给养猪业可持续发展带来威胁。迄今为止,对PSV的研究主要集中在流行病学方面,而对PSV感染后引起宿主腹泻的致病机理还暂不清楚。因此,为进一步研究PSV的致病机制,本文以PSV感染的仔猪为研究对象,对PSV在猪小肠的组织定位以及病毒对小肠黏膜形态的影响进行了研究,并进一步分析了PSV感染对仔猪肠道黏膜上皮细胞间紧密连接和上皮细胞损伤后修复的影响,主要研究内容和结果如下:1.猪萨佩罗病毒感染后在肠道组织中的定位以PSV毒株感染仔猪,建立感染模型。取仔猪肠道组织制成石蜡切片,免疫组织化学技术（Immunohistochemistry,IHC）检测PSV在仔猪小肠组织内的分布。IHC结果显示,PSV阳性信号主要存在小肠绒毛上皮细胞和淋巴细胞内。2.猪萨佩罗病毒感染对小肠上皮细胞间紧密连接的影响以人工感染PSV的猪肠道组织为材料,通过荧光定量PCR、Western Blot、IHC等方法对肠道紧密连接相关蛋白进行检测,分析PSV感染对小肠上皮细胞间紧密连接的影响。结果显示,与对照组相比,PSV感染组仔猪回肠中Claudin-3、Occludin和ZO-1的m RNA和蛋白表达水平均下降,对Claudin-3进行的免疫组化染色结果显示,PSV感染后Claudin-3在绒毛顶端的上皮细胞间减少或消失。结果表明PSV感染后可下调紧密连接相关蛋白的表达,破坏紧密连接,造成肠道屏障完整性受损,引发肠道损伤。3.猪萨佩罗病毒感染对小肠上皮损伤后修复的影响通过荧光定量PCR、Western Blot等方法对肠道干细胞增殖分化相关因子进行检测。结果显示,与对照组相比,PSV感染组仔猪Wnt/β-catenin信号通路中,β-catenin的m RNA表达水平升高;LEF1的m RNA与蛋白表达水平升高;对肠道干细胞进行免疫组化染色结果显示,PSV感染后LGR5+细胞增多。Notch信号通路中,Notch1、Notch3、Hes1的m RNA与蛋白表达水平下降,ATOH1表达水平升高,粘蛋白MUC2的m RNA的表达量升高。通过PAS染色对小肠中杯状细胞进行定位并分析阳性率,结果表明与对照组相比,PSV感染后回肠中杯状细胞显著增多。以上结果表明,PSV感染后可以促进肠道干细胞增殖并向分泌型的杯状细胞分化,分泌增强。4.猪萨佩罗病毒感染对仔猪肠道免疫的影响以人工感染PSV的猪肠道组织为材料制作石蜡切片,通过免疫组织化学对肠道相关免疫细胞进行定位,统计各肠段染色阳性率,分析肠道免疫细胞的数量、位置变化。结果显示,与对照组相比,PSV感染组仔猪空肠、回肠中CD3+T淋巴细胞的数量减少,十二指肠、回肠中CD4+T淋巴细胞的数量显著减少,与之相反的是空肠、回肠中CD8+T淋巴细胞数量显著增多。结果表明,PSV感染影响了小肠的黏膜免疫功能,提示其与PSV临床感染引起的腹泻具有一定的相关性。综合以上结果得出,PSV感染后定植在小肠绒毛上皮细胞和固有层淋巴细胞内,破坏上皮间紧密连接,致使上皮选择透过性紊乱,上皮细胞脱落;促使肠道干细胞增殖并向分泌型细胞分化,并促进粘蛋白分泌,导致吸收紊乱;上皮选择透过性紊乱,诱导增强体液免疫,致使仔猪肠道的炎症病理损伤;以上结果共同作用引起仔猪肠道屏障完整性破坏进而引发仔猪腹泻。