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目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见的严重并发症,也是造成糖尿病患者死亡的主要原因之一。糖尿病肾病病变初期表现为肾小球和肾脏体积增大,随着病程的进展出现肾小球结节状硬化,肾小管萎缩。近年来随着分子生物技术的进步,认为细胞凋亡参与了糖尿病状态下肾脏细胞由增生到萎缩的变化过程。细胞凋亡受多种因素调控,其中Bcl-2和Bax是一组凋亡相关基因,对细胞凋亡起着重要的调控作用。我院肾病研究室采用益气扶正,活血降浊,补脾益肾的二黄糖肾康(黄芪、大黄、党参、寄生、水蛭、茯苓、鬼箭羽等)治疗本病,取得了较好的疗效。我们以单侧肾切除加腹腔注射链脲佐霉素(STZ)诱导的大鼠糖尿病肾病模型为研究对象,动态观察了二黄糖肾康对糖尿病肾病大鼠肾脏功能、细胞周期、细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,以进一步探讨二黄糖肾康的作用机制,寻求防治DN的有效方药。方法:SD大鼠60只,随机抽取10只大鼠暴露右侧肾脏后缝合,作为假手术组(sham-operation group,SO)。其余50只大鼠行右肾切除术,2周切口愈合后,按50mg/kg腹腔注射链脲佐菌素(溶于0.1mol/L,Ph=4.5的枸椽酸钠缓冲液中)。48h后尾尖取血,测定血糖;取尿测尿糖及尿蛋白。血糖≥16.7mol/L,尿糖+++～++++,尿蛋白阳性者确定为模型。取40只成模大鼠随机分为模型组(M)、贝那普利治疗组(B),二黄糖肾康低剂量治疗组(EL)、二黄糖肾康高剂量治疗组(EH)、加假手术组,共五组,每组10只。给药8周,最后一次给药后,禁食8小时,称重,断头取血,分离血清测尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血糖(GLU)、胰岛素(INS)。无菌操作取左肾,去掉包膜称重,固定肾组织,以备病理组织观察、流式细胞术、免疫组织化学及原位末端标记检测。结果:1二黄糖肾康对DN大鼠BUN、Scr的影响BUN:M组(14.22±3.03)明显高于SO组(3.91±1.77)(p<0.01);治疗组与M组相比下降,有显著性差异(p<0.01)。EL组(6.19±0.85)、EH组(5.26±0.74)与B组(9.69±1.69)比较亦有显著性差异(p<0.01);EL组、EH组间无差异(p>0.05)。Scr:M组(187.78±24.55)明显高于SO组(71.24±13.06)(p<0.01);治疗组与M组相比下降,有显著性差异(p<0.01);治疗组之间无差异(p>0.05)。2二黄糖肾康对DN大鼠INS、GLU的影响INS:M组(35.69±8.71)明显高于SO组(11.78±2.54)(p<0.01);治疗组与M组相比下降,有显著性差异(p<0.01);EH组(11.33±1.91)与B组(17.59±2.67)相比有差异(p<0.05),中药治疗组间无差异(p>0.05)。GLU:M组(16.35±1.31)明显高于SO组(6.20±0.79)(p<0.01);治疗组与M组相比下降,有显著性差异(p<0.01);EL组(7.15±0.94)与B组(8.44±1.35)比较差异显著(p<0.05),EH组(5.57±0.88)与B组比较有显著差异(p<0.01),EL组、EH组间无差异(p>0.05)。3二黄降浊汤对DN大鼠KW/BW的影响KW/BW:M组(0.0112±0.0055)明显高于SO组(0.0028±0.0002)(p<0.01);治疗组与M组相比下降,有显著性差异(p<0.01);EH组(0.0032±0.0002)与B组(0.0064±0.0009)相比有差异(p<0.05),EL组、EH组间无差异(p>0.05)。4流式细胞术检测肾皮质细胞凋亡4.1流式细胞术检测细胞周期G0/G1期:M组(49.27±9.31)明显低于SO组(72.67±1.53)(p<0.01);B组(61.10±2.80)较M组升高(p<0.05),EL组(65.93±7.34)、EH组(72.10±2.69)较M组明显升高(p<0.01);EH组与B组比较有差异(p<0.05),EL组、EH组间无差异(p>0.05);B组与SO组比较有差异(p<0.05)。S期:M组(30.32±7.44)明显高于SO组(12.07±1.69)(p<0.01);B组(21.13±6.64)较M组降低(p<0.05),EL组(17.08±2.22)、EH组(11.93±2.10)较M组明显降低(p<0.01);EH组与B组比较有差异(p<0.05),EL组、EH组间无差异(p>0.05);B组与SO组比较有差异(p<0.05)。G2M期:各组之间相比,无统计学意义(p>0.05)。PI:M组(0.50±0.08)明显高于SO组(0.27±0.15)(p<0.01);B组(0.39±0.03)较M组降低(p<0.05),EL组(0.34±0.07)、EH组(0.28±0.03)较M组明显降低(p<0.01);EH组与B组比较有差异(p<0.05),EL组、EH组间无差异(p>0.05);B组与SO组比较有差异(p<0.05)。4.2流式细胞术检测细胞凋亡率M组(13.98±1.74)细胞凋亡率明显高于其余各组(p<0.01);B组(7.58±1.08)细胞凋亡率高于SO组(4.17±0.77)(p<0.01),EL组(6.34±0.95)高于SO组(p<0.05);EH组(5.24±0.44)与B组比较有差异(p<0.05),EL组、EH组间无差异(p>0.05)。4.3流式细胞术检Bcl-2及Bax相对含量Bcl-2相对含量:M组(0.83±0.16)明显低于SO组(1.00±0.14)(p<0.01);B组(1.07±0.11)与M组比较有差异(p<0.05),EL组(1.14±0.05)、EH组(1.18±0.15)与M组比较有显著性差异(p<0.01);治疗组间无差异(p>0.05)。Bax相对含量:M组(1.43±0.19)明显高于SO组(1.00±0.05)(p<0.01);B组(1.13±0.05)与M组比较有差异(p<0.05),EL组(1.11±0.13)、EH组(1.08±0.09)与M组比较有显著性差异(p<0.01);治疗组间无差异(p>0.05)。5免疫组化法检测Bcl-2及Bax的表达Bcl-2平均光密度:M组(0.098±0.01)明显低于SO组(0.139±0.02)(p<0.01);B组(0.116±0.01)与M组比较有差异(p<0.05),EL组(0.122±0.01)、EH组(0.128±0.01)与M组比较有显著性差异(p<0.01);治疗组间无差异(p>0.05)。Bax平均光密度:M组(0.140±0.04)明显高于SO组(0.088±0.01)(p<0.01);B组(0.101±0.01)较M组有统计学意义(p<0.05),EL组(0.100±0.01)、EH组(0.091±0.01)与M组比较有显著性差异(p<0.01);治疗组间无差异(p>0.05)。6 TUNEL法检测细胞凋亡SO组(0.05±0.02)大鼠肾小球内凋亡细胞极少,治疗组肾小球内凋亡细胞数明显低于M组(0.58±0.03)(p<0.01);B组(0.39±0.12)、EL组(0.38±0.17)、EH组(0.27±0.05)之间无差异(p>0.05)。M组(12.23±0.32)肾小管内细胞凋亡率明显高于SO组(3.72±0.25)(p<0.01);治疗组肾小管内细胞凋亡率明显少于M组(p<0.01);EH组(5.46±0.11)与B组(8.87±0.23)比较有显著差异(p<0.05);EL组、EH组间无明显差异(p>0.05)。结论:1二黄糖肾康能够降低尿素氮、血肌酐、血糖;增强胰岛素生物活性,降低高胰岛素血症;降低肾重/体重。2二黄糖肾康能够减少肾脏细胞凋亡的数目。3二黄糖肾康能够干预细胞周期G0/G1、G2M和S期,降低PI,从而减少细胞的过度增殖。4二黄糖肾康能够调节Bcl-2和Bax蛋白的相对表达,从而干预肾组织细胞凋亡。