烟夜蛾性肽受体的分子鉴定和棉铃虫交配对抗菌肽表达量的影响

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精液蛋白和抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)是参与昆虫生殖和免疫的重要生命物质。已有的研究显示,昆虫通过交配可以将雄虫精液蛋白转移至雌虫,从而影响雌虫的生殖行为和免疫反应。显然,探明精液蛋白作用的分子机理,对于全面了解交配对雌虫生殖行为转变和免疫能力变化的调控规律,发展影响害虫生殖过程和免疫能力的分子干扰技术等具有重要的理论及实践意义。为此,本研究选取铃夜蛾属Helicoverpa近缘种昆虫烟夜蛾H.assulta(Guenée)和棉铃虫H. armigera(Hübner)为试验材料,分别进行了烟夜蛾性肽受体(sex peptide receptor,SPR)基因的克隆与表达和7种昆虫抗菌肽基因在不同交配状态棉铃虫雌虫腹部的表达情况研究,探讨了交配对性肽受体基因和抗菌肽基因表达水平的影响规律。主要研究结果如下:(1)利用RT-PCR方法,获得了长2048bp的烟夜蛾性肽受体基因cDNA序列,该基因开放式阅读框为1275bp,推导编码424个氨基酸残基,预测分子量为48.6kD,等电点为9.25。氨基酸序列分析预测该受体含有7个跨膜区,具有G蛋白偶联受体典型的结构特征,且获得cDNA所编码的氨基酸与其它蛾类同源物氨基酸序列的一致性均超过80%。此基因暂被命名为HassSPR,已在GenBank中登录,登录号为AFH53182.1。(2)利用荧光定量PCR方法,测定了HassSPR基因在烟夜蛾雌虫不同组织、不同发育期的转录水平,结果表明,HassSPR基因在1日龄雌蛾信息素腺体、交配囊、卵巢、脑、胸神经节和肌肉中都有表达,其中在脑中表达量最高;该基因在羽化前1天雌虫信息素腺体中即有表达,但表达量较低,表达量于3日龄达到最高峰,之后又逐渐降低。(3)利用荧光定量PCR方法,研究了交配对烟夜蛾雌虫不同组织(信息素腺体、交配囊、脑和卵巢)中HassSPR基因表达水平的影响。结果显示,交配以后,雌蛾脑和信息素腺体中的HassSPR基因表达量极显著上调,而交配囊和卵巢中HassSPR基因表达量极显著下调。(4)利用荧光定量PCR方法,研究了棉铃虫交配对7种抗菌肽基因表达水平的影响。结果表明,供试的7种抗菌肽基因对交配的诱导反应不尽相同,其中交配抑制天蚕素3(Cecropin3)基因的转录,诱导天蚕素D(Cecropin D)、Moricin、防卫素(Defensin)、蚕幼抗菌肽(Lebocin)、攻击素(Attacin)和葛佬素(Gloverin)基因转录,而交配对于抗菌肽基因表达水平的影响仅局限于交配后的12h以内。
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