研究背景及意义:结核病（Tuberculosis,TB）是由结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis,Mtb）感染引起的一种高发病率和高死亡率的慢性传染病。巨噬细胞吞噬Mtb后,自噬是清除Mtb等病原体的主要宿主免疫防御机制之一。近年来受到广泛关注的缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1-alpha,HIF-1α）在许多疾病过程中不仅调节细胞代谢增强细胞免疫,还能调控自噬影响细胞存活,但在结核病中有关HIF-1α如何调控Mtb感染后巨噬细胞自噬的研究尚未见详细报道。因此,探讨Mtb感染巨噬细胞过程中HIF-1α对自噬的调控作用具有重要意义。目的与方法:本研究利用qPCR技术检测了结核病患者及健康人外周血中HIF-1α的表达,同时用牛结核分枝杆菌卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）感染RAW 264.7细胞,通过Western blot 检测 HIF-1α、Beclin 1 和 LC3 表达,并构建筛选 HIF-1α 的小干扰 RNA（siHIF-1α）。然后,用siHIF-1α转染或BCG感染RAW 264.7细胞,从细胞形态学水平和分子水平分析细胞自噬水平,以研究干扰HIF-1α对BCG诱导巨噬细胞自噬的调控作用。接着,用Western blot检测BNIP3和NIX的表达,用免疫沉淀和免疫荧光共定位验证BNIP3和LC3的相互作用情况,用mTOR抑制剂雷帕霉素（Rapamycin,RAPA）来研究HIF-1α对BCG诱导巨噬细胞自噬的调控过程是否是mTOR依赖性途径,并通过检测细胞菌载量评估巨噬细胞抗菌能力,以探讨HIF-1α对BCG诱导巨噬细胞自噬的调控机制。最后,建立HIF-1α抑制剂YC-1联合BCG感染C57BL/6小鼠模型,通过评价病理损伤以及检测小鼠肺组织中HIF-1α和LC3的表达,从体内研究BCG感染C57BL/6小鼠后HIF-1α对自噬的调控作用。研究结果表明:（1）与健康人相比,HIF-1α在结核病患者外周血中高表达;同时,在BCG感染复数（multiplicity of infection,MOI）为 10,感染时间为 12 h 时,巨噬细胞可显著上调 HIF-1α、Beclin 1和LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达量,表明BCG感染可以诱导巨噬细胞自噬和HIF-1α高表达,随后构建筛选siHIF-1α,为后续实验奠定了基础。（2）siHIF-1α抑制BCG感染后巨噬细胞内HIF-1α表达、自噬溶酶体数量、自噬流、自噬率、自噬相关蛋白表达以及ROS积累;同时,BCG感染上调细胞内BNIP3和NIX表达,并增强BNIP3和LC3相互作用,而siHIF-1α通过破坏BNIP3表达激活mTOR通路相关蛋白表达,并抑制雷帕霉素诱导的自噬流及自噬相关蛋白表达,表明HIF-1α通过mTOR依赖性途径调控BCG感染诱导的巨噬细胞自噬;此外,siHIF-1α促进巨噬细胞内BCG存活,降低了巨噬细胞的抗菌能力。（3）建立HIF-1α抑制剂YC-1联合BCG感染C57BL/6小鼠模型,YC-1影响BCG气道灌注后的小鼠体重增长,并加重小鼠肺组织坏死、中性粒细胞浸润、气道上皮细胞损伤以及肺泡腔内红细胞渗出等病变程度;同时,YC-1抑制BCG感染后小鼠肺组织中HIF-1α和LC3的表达,表明抑制HIF-1α表达阻碍BCG感染后小鼠肺组织细胞的自噬作用,从而影响小鼠体重和肺脏病理情况。综上所述,BCG诱导巨噬细胞自噬和HIF-1α高表达,而干扰HIF-1α影响BNIP3与LC3相互作用,并通过mTOR依赖性途径抑制BCG诱导的细胞自噬;同时,干扰HIF-1α抑制ROS积累并促进细胞内BCG存活,降低巨噬细胞抗菌能力。此外,HIF-1α抑制剂YC-1阻碍BCG感染后C57BL/6小鼠肺组织细胞的自噬作用,而影响小鼠体重增长,并加重其肺组织病变程度。研究结果揭示HIF-1α可促进BCG感染诱导的细胞自噬。