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目的:研究复合了脂肪干细胞培养提取液的脱细胞羊皮对小鼠创面愈合的影响。 方法: (1)宰杀健康成年绵羊并立即剥下整张羊皮消毒,鼓式取皮机反削为断层皮片,用胰蛋白酶溶液消化法制备成脱细胞羊皮,并取组织固定切片HE染色检测脱细胞情况。 (2)取消毒后小鼠腹股沟处脂肪,利用酶消化法,提取分离鉴定小鼠脂肪干细胞,提取小鼠脂肪干细胞培养上清液。 (3)随机选取28只小鼠分为4组,制备小鼠背部全层皮肤缺损模型,以小鼠脂肪干细胞培养提取液复合脱细胞羊皮处理小鼠右侧创面侧为实验组,小鼠左侧创面单纯覆以脱细胞羊皮为对照组,分别在创伤后第7d、14d、21d、28d四个时相点观察两组创面的愈合情况,并进行免疫组化检测。初步探讨脂肪干细胞培养提取液复合脱细胞羊皮对创面愈合的作用机制。采用SPSS18.0统计软件进行数据处理。计量资料用均数±标准差(x±s)表示,以P<0.05为有统计学意义。 结果: (1)制备的羊脱细胞真皮基质感柔韧且具有弹性,不易碎裂,具有一定抗牵拉强度,呈疏松多空状羊皮支架,无细胞毒性; (2)分离培养的细胞可长期自我更新和在特定的条件下可分化形成多种终末细胞的潜能,经鉴定为脂肪干细胞,传代培养至第四代,获取小鼠脂肪干细胞; (3)动物实验中,在实验各时间点上,与对照组相比,实验组小鼠创面愈合率明显高于对照组,均有统计学意义(P<0.05); (4)各时间点小鼠创面表皮细胞生长因子和Ⅰ型胶原蛋白均成阳性表达,随时间增长其表达逐渐增多,28d阳性表达更显著。7d时创面Ⅰ型胶原蛋白即有明显的阳性表达,随时间延长,Ⅰ型胶原蛋白阳性表达逐渐增多,主要表达于肉芽组织及血管内皮细胞周围,呈小团块无序线性排列,21d、28d时真皮层可见大量胶原,数量多且粗大。此外,各时间点上,实验组创面I型胶原蛋白和血管内皮细胞生长因子的表达均较对照组高,比较有明显差异(P<0.05)。 结论: 1、脱细胞羊皮质感柔韧有弹性,不易碎裂,具有一定抗拉强度,呈疏松多空状羊皮支架,对细胞种植无毒性的。 2、小鼠腹股沟脂肪组织通过消化后贴壁培养纯化,可获得具有多向分化潜能的脂肪干细胞,获取脂肪干细胞培养上清液。 3、羊脱细胞真皮基质联合应用脂肪干细胞培养基上清液比单纯应用羊脱细胞真皮基质更能有效的促进小鼠创面的愈合,同时在创面中I型胶原蛋白和血管内皮细胞生长因子表达较高。