肝素是糖胺聚糖类药物,具有较强的抗凝作用,是目前治疗血栓栓塞性疾病的首选药物。此外,肝素还被应用于抗炎、抗病毒、抗癌等领域。肝素作为一种多活性药物,在用于抗凝以外的其他用途时,出血副作用成为最大障碍。前人研究发现,肝素结构中的硫酸基含量和位置对其抗凝活性起着重要作用。为了降低肝素的抗凝活性、探讨新型多糖类药物,有目的性的对肝素进行适当的化学修饰,简化肝素链的结构显得尤为重要。基于此,本文致力于研究系列脱硫酸化肝素的制备方法,及肝素/硫酸类肝素裂解二糖定性定量检测的标准方法的建立,并将该方法应用于脱硫酸化肝素的结构表征。本论文主要从以下四个方面进行阐述:第一章综述了肝素和硫酸类肝素的基本结构、功能及其应用;肝素衍生物的结构与功能,脱硫酸化肝素的制备方法及应用;着重介绍了肝素和硫酸类肝素二糖的制备及其结构表征方法;此外,还介绍了本论文的研究意义与研究内容。第二章以市售肝素钠为原料,经逐步脱氧位硫酸化法及脱N-位硫酸基再乙酰化法制备了三个系列(NHS03系列、NAc系列及NH3+系列)脱硫酸化肝素,分别运用酶解法和亚硝酸裂解法对所制备的脱硫酸化肝素进行裂解,并用强阴离子交换高效液相色谱(SAX-HPLC)法对所制备的脱硫酸化肝素进行初步结构分析。第三章基于离子对反向高效液相色谱串联电喷雾离子阱飞行时间质谱(IPRP-LC-MSITTOF)技术,建立了一种能快速定性定量分析包括四种N-非取代葡萄糖胺肝素二糖在内的十二种肝素/硫酸类肝素二糖的方法,分别优化了色谱分离及质谱检测条件。并比较了该方法与文献报道方法对生物样品中的硫酸类肝素酶解产生的二糖的检测结果,二者检测结果基本相符,表明该方法能够快速准确的对生物样品进行定性定量检测,该方法检测限低、重现性好、应用范围广泛。第四章以第三章建立的标准方法为基础,对第二章所制备的三个系列脱硫酸化肝素进行结构表征。结果表明本实验提出的逐步脱硫酸化法能有效的制备具有特定二糖组成的脱硫酸化肝素。比较了本实验所制备的脱硫酸化肝素裂解二糖经凝胶色谱柱脱盐脱蛋白处理前后的检测结果,结果表明二者检测值差异极小,说明本实验所建立的标准方法的样品前处理简单,特异性强,适用范围广泛。