论文部分内容阅读
Fther-a-go-gorelatedgene(ERG)基因编码的钾离子通道是与正常心律相关的重要离子通道之一。ERG基因编码延迟整流钾离子通道中的快速作用元件,ERG基因的突变可引起人类遗传性QT间期延长综合征并可导致致死性的心律失常。
在本论文中,我们以AB系斑马鱼为模式生物,以已知的Tubingen系斑马鱼的ERG同源基因序列为依据设计引物,通过逆转录和PCR扩增的方法(RT-PCR),将其扩增、克隆AB系斑马鱼的ERG基因的eDNA序列并测序,构建重组载体。ERG基因丰度极低,使用RT—PCR的方法扩增斑马鱼中ERG的同源基因十分困难。通过生物信息学手段,将斑马鱼的ERG同源基因与其他生物的ERG基因进行比较,可见高度的同源性,系统进化学角度上与非洲爪蟾的相似性最高,与哺乳动物也比较接近。由此显示,ERG基因在系统进化过程中保守性很强,其表达产物可能与最基本的生理功能有关。
用RNA探针整体原位杂交研究斑马鱼胚胎发育过程中ERG同源基因的表达。结果显示:斑马鱼鱼卵受精后24小时开始开始出现ERG同源基因的转录产物,并在此后的发育过程中持续表达。用斑马鱼ERG同源基因的morpholino反义寡核苷酸探针注射进入斑马鱼胚胎,下调ERG同源基因在斑马鱼中的表达,观察到与探针注射剂量密切相关的特异心律失常,主要表现为房室传导阻滞。用钾离子通道特异性阻滞剂诱导斑马鱼胚胎,可以观察到与morpholino反义寡核苷酸探针相类似的作用。以上实验都说明,ERG同源基因的表达产物在斑马鱼的发育过程中,与正常心律的形成有密切的关系。