前言 心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)损伤是指心肌在缺血基础上恢复血流后组织损伤加重的病理现象。随着分子生物学理论和技术的发展，人们逐步发现，其病理变化的核心是基因表达及其调控问题。参与这些基因调节的重要成份是由核因子-κB(Nuclear factor-κB，NF-κB)和κB抑制性蛋白(Inhibitory kappaB，IκB)组成的复合物。NF-κB调节多种即早基因表达，参与免疫，炎症和细胞防御等反应。潜伏在胞浆中的NF-κB由IκBs调节。当刺激引起细胞兴奋时，IκBs被磷酸化、泛醌化后降解，释放出NF-κB转入核内，与同族DNA结合，诱导基因表达。肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)是一个常见炎性因子，NF-κB激活可上调TNF-α表达，反过来高表达的TNF-α又能激活NF-κB，它在心肌I/R损伤中起重要作用。 本研究前期工作已证明，中药白花前胡(Peucedanum Praeruptorum Dunn，BQ)对心肌I/R损伤有保护作用，其有效成分之一前胡甲素(dl-Praeruptorin A，Pd-Ia)是一种钙通道阻滞剂和钾通道开放剂，它通过抑制凋亡蛋白Fas、bax、bcl-2表达和降低IL-6水平保护心肌免受I/R损伤，但有关该药对其基因表达的影响尚不清楚。本实验用离体心脏模型和酶联免疫吸附(ELISA)等技术，对比研究了BQ和Pd-Ia对NF-κB活性和TNF-α表达的影响，进一步从分子水平探讨白花前胡对I/R心肌的保护机制。 材料与方法 wist。大鼠阳00－400 g）64只，雌雄兼备，随机分成9组：即空白对照组；溶剂对照组；地尔硫卓 1．2 pmol·L－’；BQk m·L－‘）0．1，0．5，二．0〕；Pd－la［（pmol·L－’）0．2，1．0，3．0）。锤击法处死大鼠，开胸取出心脏与灌流装置相连，稳定给药30 min后停灌10 dn复灌30 dn。在缺血前和再灌注后10 min在0 min。30 min测量心肌收缩力（MCX心率（HR）和冠脉流量（CF人同时收集灌流液测定乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶＊K）活性、试验结束后切取左室肌用于胞浆胞核蛋白提取和HE切片制作。实验结果用均值上标准差表示，以单因素方差分析（One－way ANO－VA）多断组间差异，p＜0．05有显著意义。NF－＊活性和 TNF－a表达的关系用相关性分析确定。 实验结果 1．对心脏血流动力学影响 BQ和 PdJ 均剂量依赖性抑制 MC，轻微降低 HR，但对 CF作用不同：前者增加，后者呈双向作用。其中 BQ 0．5 g·L－’使CF从（6．61。5．78）院增至（27．40。48．16）％（P＜0．of，ys空白组）。豆．0 g·L－’使 HR抑制率从＊．34。9．31）％增至（25．98 t10．28）％（P＜0．01，VS空白组人但抑制 MC的作用无统计学意义（P＞0．05，VS空白组）。Pd－la（0．2 pmol·L’，二．0 pmol·L－‘，3．0卜mol·L－‘）使 MC抑制率分规（ZI．80。10．03）动增至（32．82 L 19．76）％，（54．66土 19．56）％和（57．10土29．97）院门＜0．05，VS溶剂组人地尔硫革（Dil）对 MC和 CF的影响不显著，但可明显抑制 HR（P＜0．of，VS空白组人 ·2· 2．对NF一 ＊活性影向 BQ和 Pd－la均抑 ＄J NF’－＊活性，其中 BQ 0．ig·L－‘使＊F－KB活性（吸光值）从互．32。O．6o降至O．8二。o．13（P＜O．0且，vs空白组）。Pd－la 0．二 pmc·l·L－’和二．0 pmol·L－‘使 NF－＊从0．98士0．13分另降至0．60土口．14和0．65士O．17（P＜o．05，VS溶剂组人 Dil亦能降低 NF－KB活性计＜0．05，VS空白组人但不如 BQ 0．ig·L－‘作用明显。 3．对TNF—a表达影响 BQ和Pd－la均降低hIF－。表达，其中 BQ 0．5 g·L－’使’fN F－a从（16．5。2．1）卜g·L－‘降至（11．9。3．9）卜g·L“（P＜0．05，vs空白组）。Pd一 la （．0 pmol·L－’，3．0 pmol·L－‘）使TNF－。从（13．7 S6．互）pg·L－‘降至（9．4。2．7）pg·L－’和（10．3土2．2）卜g·L－‘（P＜0．01，＊S溶剂组）。 4．NF－KB活性和TNF·－。表达的相关性分析 在PdJ 组中NF一咄活性和TNF－a表达存在正相关性，其中 Pd＊．0 umol·L－‘的相关系数为0．65，而 BQ组中H者的相关性较小。 5．对 LDH和 CK影响 BQ和 PdJ 均降低 CK，但两药对 LDH的影响差异较大。 6．病理学观察 对照组的中性粒细胞浸润明显增加。用药组（BQJd－la和Du）虽亦有中性粒细胞浸润，但均较对照组减轻。 讨 论 据研究证明／心肌I／R损伤可迅速激活NF－KB活性，而抑制NF－d激活能缩小梗死面积，减轻中性粒细胞聚集，阻止多种炎症因子如 TNF－a＊L一 6＊L－6生成，促进心肌功能恢复，减轻 ·3·UR损伤。本实验结果除进一步验证了上述观点外，还首次证明，BQ及其有效成分之一 PdJ 均能抑制 I／R心肌 NF一叨活性，下调 TNF－a表达，特别是N－la组中 N