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[目 的]恶性胸膜间皮瘤(Malignant pleural mesothelioma,MPM)是一种源自胸膜表面具有高度侵袭性的罕见恶性肿瘤,近年来发病率和死亡率持续性增长。该病预后差,中位生存期仅为8-14个月,预后不良的主要原因是缺乏有效的治疗方案。LncRNA MALAT1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1)是lncRNA家族重要成员,作为癌基因在很多肿瘤的发生发展中发挥着重要作用,但是LncRNAMALAT1在MPM发生发展中的生物学功能和调控机制尚无研究。本研究将探讨LncRNA MALAT1在MPM细胞中的分子生物学功能和具体调控机制,为MPM的靶向治疗提供新的靶点和治疗思路。同时,通过靶向MALAT1治疗后荷瘤动物模型的多模态影像学定量分析,为将来靶向MALAT1治疗MPM的疗效评价和随访提供参考。[方法]第一部分LncRNAMALAT1促进恶性胸膜间皮瘤细胞增殖侵袭机制的实验研究及靶向治疗影像学评价首先,采用慢病毒转染特异性敲低MPM细胞的MALAT1表达水平并制备稳转细胞株。通过CCK8、克隆形成、EdU实验以及细胞凋亡和细胞周期检测敲低MALAT1对于MPM细胞增殖能力的影响,划痕愈合实验和Transwell实验检测对迁移和侵袭能力的影响。然后,建立裸鼠移植瘤模型,体内验证MALAT1对MPM细胞增殖能力的影响。最后,对两组荷瘤动物模型进行MRI(常规扫描+多b值DWI扫描)、18F-FDGPET/CT及Micro-CT检查,多模态影像学定量评估靶向MALAT1治疗MPM的效果。第二部分 LncRNAMALAT 1/miR-141-3p/YAP1-TEAD1-Hippo 信号轴促进恶性胸膜间皮瘤细胞增殖和侵袭的机制研究首先,采用双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1与miR-141-3p之间的直接结合关系。慢病毒转染过表达MPM细胞内的miR-141-3p并制备稳转细胞株,通过CCK8、克隆形成、EdU以及细胞凋亡和细胞周期检测过表达miR-141-3p对于MPM细胞增殖能力的影响,划痕愈合实验和Transwell实验检测对迁移和侵袭能力的影响。然后,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与YAP1 mRNA的直接结合关系。RT-qPCR和Western blot方法分别检测敲低MALAT1和过表达miR-141-3p对MPM细胞YAP1及TEAD1 mRNA/蛋白表达水平的影响。采用质粒转染特异性敲低MPM细胞中YAP1,通过CCK8、克隆形成、EdU实验检测敲低YAP1对MPM细胞增殖能力的影响,Transwell实验检测对侵袭能力的影响。最后,通过回复实验来进一步验证LncRNA MALAT1/miR-141-3p/YAP1-TEAD1-Hippo信号轴在MPM细胞增殖、侵袭中的作用。[结 果]第一部分LncRNA MALAT1促进恶性胸膜间皮瘤细胞增殖侵袭机制的实验研究及靶向治疗影像学评价RT-qPCR 结果显示,三种人 MPM 细胞(NCI-H226、NCI-H2452、MSTO-211H)尤其是上皮型MPM细胞NCI-H226和NCI-H2452的MALAT1表达均升高。CCK8、克隆形成、EdU以及细胞凋亡比例和细胞周期结果显示敲低MALAT1抑制了两种MPM细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验结果显示敲低MALAT1抑制了 MPM细胞的迁移和侵袭能力。移植瘤实验结果显示,敲低MALAT1导致肿瘤生长速度和体积显着降低。MRI常规扫描显示,sh-NC组裸鼠的肿瘤生长迅速,肿瘤体积大,对周围组织有明显压迫现象;与sh-NC组相比较,sh-MALAT1组裸鼠肿瘤生长缓慢,肿瘤体积明显较小,对周围组织的压迫现象不明显。多b值DWI扫描分析显示,与sh-NC组相比,sh-MALAT1组的ADCslow明显升高,灌注比例f值明显降低。18F-FDG PET/CT扫描结果显示,sh-NC组肿瘤区域SUVmax与SUVmean为11.3±0.42、10.8±0.16,正常组织区域为6.9±0.33、6.2±0.18,P均<0.05;sh-MALAT1组肿瘤区域 SUVmax 与 SUVmean 为 14±0.22、13.7±0.12,正常组织区域为 12.5±0.27、12.1±0.11,P均>0.05。相较于sh-NC组,sh-MALAT1组裸鼠肿瘤区域与正常组织区域18F-FDG放射性摄取值差异明显缩小。Micro-CT扫描结果显示,sh-NC组裸鼠移植瘤体积大且密度不均匀,可见局部坏死形成的区域,sh-MALAT1组移植瘤体积小,瘤体密度相对均匀。第二部分 LncRNAMALAT1/miR-141-3p/YAP1-TEAD1-Hippo 信号轴促进恶性胸膜间皮瘤细胞增殖和侵袭的机制研究双荧光素酶报告基因实验显示,MALAT1与miR-141-3p之间存在直接结合关系。RT-qPCR结果显示,MPM细胞中miR-141-3p与MALAT1的表达呈负相关。CCK8、克隆形成、EdU以及细胞凋亡比例和细胞周期结果显示过表达miR-141-3p抑制了 MPM细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验结果显示过表达miR-141-3p抑制了 MPM细胞的迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-141-3p与YAP1 mRNA之间存在直接结合关系。RT-qPCR和Western blot结果显示,敲低MALAT1和过表达miR-141-3p均能降低MPM细胞YAP1及TEAD1 mRNA/蛋白表达水平。CCK8、克隆形成、EdU结果显示敲低YAP1抑制了 MPM细胞的增殖能力,Transwell实验显示敲低YAP1抑制了 MPM细胞的侵袭能力。回复实验:RT-qPCR和Western blot结果显示,由敲低MALAT1引起的MPM细胞YAP1和TEAD1 mRNA/蛋白表达水平降低可被miR-141-3p inhibitor所回复。CCK8、克隆形成、EdU以及细胞凋亡结果显示由敲低MALAT1引起的MPM细胞增殖能力降低可被miR-141-3p inhibitor所回复,Transwell实验显示,由敲低MALAT1引起的MPM细胞侵袭能力下降可被miR-141-3p inhibitor所回复。[结论]1.LncRNA MALAT1促进了 MPM细胞的增殖、迁移和侵袭能力。2.荷瘤动物模型的多模态影像学检查定量分析验证了靶向MALAT1治疗MPM的疗效,对未来的疗效评价和随访有重要参考价值。3.LncRNAMALAT1/miR-141-3p/YAP1-TEAD1-Hippo 信号轴促进了 MPM细胞的增殖、迁移和侵袭能力。