论文部分内容阅读
前言 心肌梗死是一种严重危害人们健康的疾病，其发生和发展与各种危险因素，如高血压、高血脂、糖尿病、肥胖和吸烟等因素密切相关。然而，在一些个体中，心肌梗死却与常见危险因素无明确相关，而可能是遗传因素诱发冠状动脉粥样硬化及栓塞并发症的发生。晚近，人们已经认识到基因多态性如：血管紧张素原M235T变体、血管紧张素转换酶基因DD型及载脂蛋白E基因的E4等位基因是冠状动脉粥样硬化的遗传危险因素。随着人们对一氧化氮(NO)能抑制平滑肌细胞增生，防止血小板聚集及舒张血管等方面作用的认识，开始探讨了内皮型一氧化氮合酶eNOS与冠状动脉粥样硬化的相关性。1998年日本人Kiyoshi发表了《eNOS基因外显子7Glu-Asp298多态性与急性心肌梗死相关性》的报道，而同年法国人Poirier-O发表了《eNOS基因多态性与心肌梗死无相关性》的文章。为了进一步了解急性心肌梗死AMI与eNOS合酶基因多态性的相关性，本研究通过巢式聚合酶链反应PCR、酶切方法测定急性心肌梗死eNOS基因外显子7G894T突变率，探讨eNOS基因外显子7G894T突变与急性心肌梗死发病的相关性。 实验方法 选择AMI患者107例及年龄、性别相匹配的健康对照组59例，静脉血中提取基因组DNA，用合成的引物，通过巢式聚合酶链反应(PCR)扩增获得目的片段，限制性内切酶消化目的片段，紫外透射分析仪检测，计数基因型及突变基因频率，然后通过X‘检验有无统计学意义。 实 验 结 果 eNOS基因外显子 7的 894位点有 3种基因型：GG、GT、T。AMI组 107例中有 25例发生 G894T突变，其中纯合于 9例，杂合子 16例。对照组 59例中有 8例发生 G894T突变，其中纯合子0例，杂合子8例。两组等位基因纯合子突变具有非常显著统计学意义，X’＝5．247，p＜0．05，两组等位基因总突变率（纯合于十杂合子）无明显微学意义，X‘＝2．296，P＞0．05。 讨 论 遗传因素与疾病发生密切相关。eNOS基因多态性与急性心肌梗死有强的相关性。eNOS有三种不同异构体：神经元型（nNOSI型厂诱导型ONOS 11型）和内皮型 （eNO Ill型人 eNOS基因位于7号染色体7 q35Jq36区域，由 26个外显子组成，全长21kb。eNOS催化精氨酸合成一氧化氮（NO人NO是一种重要内皮源性舒张因子，在血管收缩调节血流和血压方面起重要作用。NO能抑制平滑肌细胞增生，防止血小板聚集，阻止血小板、白细胞粘附于血管内皮细胞。NO由内皮细胞弥散到血管平滑肌细胞，它刺激鸟耷酸环化酶，使环化鸟音酸＊GMP）增加导致血管舒张。如果这些重要机制发生紊乱，将导致血管内皮破坏＼粥样硬化形成。血小板聚集、血管舒缩障碍、血压升高，易诱发急性心肌梗死。 eNOS基因多态性与急性心肌梗死的相关性研究主要反应在eNOS基因Gin298Asp多态性上。外显子7G894T的突变导致 ·2·eNOS基因mRNA298位GAG所编码的谷氨酸变成GAT编码的天冬氨酸，即Gin298AsP，从而影响eNOS的一级结构并使其活性发生改变，使NO合成减少导致血小板聚集性增强，血管紧张性增高甚至冠状动脉痉挛，诱发AMI发作。最近研究发现带有ASP298的eNOS基因转染细胞后可以分裂成100kDa和35kDa的两个片段，通过内源性蛋白酶影响eNOS的功能。目前，关于eNOS基因Glu298ASP多态性的研究不多，而且研究结果不一致。国内尚无此方面报道。本实验首次在国内采用实验对照方法证实了该基因多态性G894T与AMI密切相关，与Xiyoshi等的报告一致。 本实验在年龄、性别无明显差异的两组人群中，通过引物序列特异性nR法检测，显示在894位点有3种基因型GG、GT、h。T／T纯合子出现率为”八，8．4％人高于日本人wOShi报道的频率O／226，2．2％人而较CaiH检测发现的澳大利亚白种人冠心病病人298－ASP纯合子出现频率（男性’11．0％，女性13．7％）明显降低，说明不同种族人群的基因类型有差异。AMI患者的T等位基因携带频率明显高于对照组h＜0．05人提示 G894T等位基因突变可能为AMI发病的一个危险因子，而G894T杂合于突变与AMI无相关h＞0．05凡此结果与 iyOShi实验结果一致。另外，在纯合子突变中，男性明显多于女性难：1L吸烟者多于不吸烟者问：2L但性别、吸烟是否与突变有关，因病例数少，需进一步研究。本研究显示了AMI的一个新的遗传危险因素。G894T的多态性纯合子可能是AMI发病诱因。然而这种多态性仅能解释小范围AMI遗传易感，还需要进一步研究确定eNOS导致AMI易感的分子学机制。 结 论 eNOS基因 894位点 T／T等位基因突变是 AMI发病的危险因 ·3·子，而G894T杂合子基因突变与AMI发病无明显相关性。纯合子突变者中男性明显多于女性材：lh吸烟者明显多于不吸烟者门：2）。