论文部分内容阅读
恶性肿瘤严重威胁人类健康，亟需发展多种治疗方法改善肿瘤的预后。PUMA(p53 up-regulated modulator of apoptosis)是2001年报道发现的具有快速强大促凋亡作用的p53下游基因。本研究旨在探讨载有PUMA的复制缺陷型腺病毒(Ad-PUMA)用于治疗恶性肿瘤的可行性，检测Ad-PUMA与化疗药合用对肿瘤细胞的增效作用及可能机制，并与Ad-p53进行比较。结果表明在p53状态不同的食管癌细胞系、HPV状态不同的宫颈癌细胞系中，Ad-PUMA均比Ad-p53显现更强大的细胞生长抑制作用；Ad-PUMA在多种组织来源的肿瘤细胞中可增强化疗药的疗效；在人食管癌细胞系KYSE150细胞中证实Ad-PUMA与化疗药物合用有协同作用，裸鼠移植瘤实验结果表明Ad-PUMA比Ad-p53化疗增效作用更强。外源PUMA的导入不影响化疗药对细胞周期造成的改变，但可加强化疗药诱导的凋亡。PUMA的促凋亡作用是通过诱导Bax寡聚化、激活Caspase9实现的，Bcl-2高表达可减弱Ad-PUMA对细胞的生长抑制作用。 广泛用于基因治疗的腺病毒载体Ad5和Ad2主要通过柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor，CAR)感染宿主细胞。CAR在不同肿瘤细胞膜上的表达水平并不相同，这种差异有可能影响腺病毒的感染效率。本研究通过荧光显微镜、流式细胞术检测发现载有绿色荧光蛋白的Ad5型腺病毒Ad-GFP对不同种、甚至同种上皮来源的恶性肿瘤细胞系的感染效率差异较大，感染效率与Western blot、免疫细胞化学实验检测到的CAR表达水平呈正相关，在体内实验中也证实了这种正相关的存在。 以上结果表明Ad-PUMA联合化疗药治疗恶性肿瘤有可能是一种非常有前景的治疗手段，治疗前检测患者肿瘤组织中CAR表达水平有助于规范Ad5和Ad2型腺病毒为载体的基因治疗药物在临床中个体化使用。