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目的1.研究过量的甲状腺素对负透镜诱导近视豚鼠模型的等效球镜度、眼轴长度、体质量和肛门温度的影响,为探究甲亢与近视关系奠定基础,为近视防控提供新的思路。2.利用酶联免疫吸附实验(ELISA)对豚鼠血清中的雌二醇(estradiol,E2)、睾酮(testosterone,T)、游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)及血清中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)和环磷酸鸟苷(cyclic guanosinc monophosphate,cGMP)水平进行分析,探究甲状腺功能亢进型豚鼠的血清激素水平和环核苷酸水平变化,初步阐明甲状腺素过量加重近视病程的生物学基础和分子机制。3.利用定量聚合酶链式反应(Real-time Quantitative PCR,qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot),探究甲状腺素对负透镜诱导近视豚鼠模型的视网膜中胰岛素样生长因子1(Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1)和巩膜中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的m RNA和蛋白表达水平的变化,进一步阐明甲状腺素过量加重近视病程的分子机制。方法1.选取45只2周龄英国种雄性三色短毛豚鼠,被随机分为3组:正常对照(Normal control,NC)组、透镜诱导性近视(Lens-induced myopia,LIM)组和甲状腺素+透镜诱导性近视(TH+LIM)组。造模期间,环境温度控制在24℃左右,保持12h/12h的昼夜节律。TH+LIM组于每日上午8:30~10:30腹腔注射左旋甲状腺素钠水溶液(剂量0.05mg·kg-1);在同一时间,NC组和LIM组腹腔注射等量的生理盐水。注射第4天起,连续4周,LIM组、TH+LIM组右眼均戴-6.00D镜片;左眼作为自身对照眼不戴镜。NC组的眼不做任何处理。观察动物的一般形态学行为变化;分别记录联合造模后0周、联合造模后1周、联合造模后2周、联合造模后3周和联合造模后4周豚鼠的体质量(精确到0.01g);使用Vicks温度计测量联合造模后0周、联合造模后1周、联合造模后2周、联合造模后3周和联合造模后4周的豚鼠的肛门温度;使用带状光检影镜和眼科A超仪分别于戴镜0周、戴镜2周、戴镜4周分别进行屈光度及眼轴长度的测量与记录。2.ELISA检测豚鼠血清的激素水平和环核苷酸水平。联合造模4周后心脏穿刺取血,离心后得到血清,并置于-80℃冰箱备用。采用ELISA检测各组血清中FT3、FT4、E2、T激素水平和c AMP、cGMP环核苷酸水平的变化。3.测量后极部巩膜厚度。豚鼠造模4周后,用戊巴比妥麻醉,迅速挖取眼球,用眼球固定液将其固定脱水,石蜡包埋,在石蜡切片机上平行于视神经方向切片,视盘附近收集切片(约4μm),经苏木精-伊红(HE)染色得到的石蜡切片,在200倍率光镜下测量各组后极部巩膜的厚度,将每组切片的中央厚度作为测量值。4.联合造模4周后麻醉处死并摘取豚鼠右眼眼球,用qPCR和Western blot检测3组豚鼠视网膜中IGF-1、巩膜中MMP-2和STAT3的m RNA和蛋白表达水平的变化。结果1.利用甲状腺素腹腔注射和负透镜诱导联合造模法成功构建甲状腺功能亢进型和透镜诱导性近视豚鼠模型。联合造模4周后,TH+LIM组豚鼠出现毛发枯槁无光泽、易脱落,多食消瘦,大便干结色黑,易怒躁动,兴奋好斗,力大不易抓取,活动频率增高等甲状腺功能亢进临床症状,NC组和LIM组表现正常。与NC组和LIM组相比,腹腔注射甲状腺素1周后,TH+LIM组豚鼠肛门温度显著升高;腹腔注射甲状腺素2周后,TH+LIM组豚鼠体重明显下降,并一直持续到4周造模结束后。联合造模4周后,LIM组的屈光度和两眼的屈光度差值(右眼减去左眼)显著低于NC组,TH+LIM组造模眼的屈光度和两眼的屈光度差值均显著低于LIM组。LIM组的眼轴、左右眼的眼轴差值显著长于NC组。TH+LIM组的眼轴短于LIM组,但左右眼的眼轴差值明显高于LIM组。2.造模4周后,与NC组相比,LIM组FT3、FT4、E2、T激素水平及c AMP、cGMP环核苷酸水平及c AMP/cGMP比值不变;TH+LIM组的FT3、FT4、E2及c AMP的激素水平显著升高,T激素水平显著降低,c AMP/cGMP比值明显升高,cGMP激素水平不变。与LIM组相比,TH+LIM组的FT3、FT4、E2及c AMP的激素水平显著升高,T激素水平显著降低,c AMP/cGMP比值升高。cGMP激素水平不变,差异没有统计学意义。3.HE染色结果显示:联合造模4周后,NC组、LIM组、TH+LIM组豚鼠的后极部巩膜依次变薄。NC组豚鼠的后极部巩膜的厚度正常,胶原纤维较粗,纤维排列规则紧密,且无断裂现象;LIM组豚鼠的巩膜变薄,胶原纤维疏松变细,间隙变大,仍未见纤维断裂现象;TH+LIM组豚鼠造模眼的后极部巩膜最薄,胶原纤维最细,排列疏松,且部分纤维出现断裂现象。4.分子实验结果显示:腹腔注射左旋甲状腺素钠水溶液4周后,与NC组相比,LIM组和TH+LIM组豚鼠经负透镜诱导后,视网膜中IGF-1、巩膜中MMP-2和STAT3的m RNA水平和蛋白水平均明显升高;与LIM组相比,TH+LIM组豚鼠视网膜中IGF-1、巩膜中MMP-2和STAT3的m RNA和蛋白水平均明显升高,且有统计学差异。结论甲状腺素使负透镜诱导条件下的豚鼠近视程度加深,这可能与视网膜中IGF-1、巩膜中MMP-2和STAT3表达水平升高有关。