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目的:观察丙戊酸钠(Valproic acid sodium,VPA)对体外培养的人结肠癌HT-29细胞增殖、自噬的影响,并探讨丙戊酸钠具体的作用机制。方法:体外培养人结肠癌HT-29细胞,用不同浓度的VPA含药培养基(VPA浓度分别为0mmol/L、2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L、16mmol/L)分别干预不同时间(0h、12h、24h、48h),倒置显微镜下观察各组细胞的生长状态。CCK8(Cell Counting Kit-8)法检测不同浓度及时间的药物干预对细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(real-time PCR)法定量分析LC3、Beclin-1 mRNA的表达量变化。免疫印迹实验(Western Blot)法检测自噬相关基因LC3、Beclin-1、mTOR及p-mTOR蛋白的表达水平。结果:1.倒置显微镜下细胞形态观察:空白组细胞贴壁紧密,生长活跃,形态饱满,胞质丰富。药物干预组细胞贴壁不紧密,生长速度变慢,细胞皱缩,可见坏死漂浮细胞。2.CCK8检测细胞增殖抑制率:在VPA浓度分别为0mmol/L、2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L、16mmol/L时,干预12小时后,不同浓度组抑制率对应为(0.03±0.01)%、(6.58±0.36)%、(8.74±0.66)%、(16.45±0.8)%、(18.49±0.43)%,干预24小时后,随着浓度的逐渐增大,HT-29细胞的增殖抑制率分别为(0.02±0.02)%、(10.43±0.45)%、(15.29±0.5)%、(28.94±0.3)%、(40.23±0.25)%,干预48h后,不同浓度细胞的增殖抑制率分别为(0.02±0.01)%、(19.22±0.32)%、(26.53±0.34)%、(41.82±0.25)%和(44.54±0.62)%。各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。3.实施荧光定量PCR检测人结肠癌HT-29细胞中LC3、Beclin-1基因表达的改变:应用荧光定量PCR结果提示:当VPA浓度分别为0mmol/L、2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L、16mmol/L时,LC3 mRNA表达水平依次为(0.95±0.04)、(1.42±0.34)、(1.53±0.35)、(1.98±0.26)和(2.13±0.31),Beclin1 mRNA的表达水平依次为(0.98±0.01)、(1.73±0.28)、(1.88±0.19)、(2.07±0.04)和(2.11±0.29)。实验组与对照组比较及实验组间比较,差异具有统计学意义(p<0.05)。4.免疫印迹实验法检测自噬相关基因LC3、Beclin-1、mTOR及p-mTOR蛋白的表达水平:Western blot结果提示空白对照组和16mmol/LVPA组LC3表达水平依次为(0.99±0.12)vs(2.39±0.37)、Beclin1表达水平依次为(1.01±0.15)vs(1.52±0.21),mTOR表达水平依次为(1.04±0.17)vs(1.16±0.21),p-mTOR表达水平依次为(1.12±0.27)vs(0.74±0.04)。将VPA组mTOR蛋白表达水平与对照组相比,其结果无统计学意义(p>0.05);与对照组相比,VPA组p-mTOR蛋白表达水平下调,且其结果具有统计学差异(p<0.05)。结论:1.VPA可有效抑制体外培养的人结肠癌HT-29细胞的增殖,且随着VPA的浓度增大及干预时间的增加,对人结肠癌HT-29细胞的增殖抑制增加;2.VPA可诱导体外培养的人结肠癌HT-29细胞发生自噬性死亡,其机制可能与负性调解mTOR通路相关。