鸡血藤是治疗类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）的常用中药材,目前,主要通过透皮给药方式,使活性成分透过皮肤直接抑制炎症部位产生的环氧化酶-2（COX-2）治疗RA,所以在透皮成分中筛选COX-2抑制剂对RA的治疗具有重要意义。由于透皮成分微量,会增加分析难度,也为活性成分筛选带来挑战,所以需要新的方法与技术对透皮成分全面分析及活性成分筛选。目前,传统的成分分析方法极易忽略微量成分,且对多种成分的同时检出也具有难度;活性成分筛选方法如固定化酶法和超滤离心法,虽可筛选活性成分,但都存在一定的局限性。本课题组自主研发的二维碳纤维组分分离体系（2DμCFs）是根据碳纤维、活性炭纤维表面性质的差异所构建的组分分离体系,通过与高分辨质谱的联用可实现对微量成分的快速、高灵敏分析;多室电泳（MCESS）是集电泳、膜分离技术、靶分子亲和技术于一体的活性成分筛选技术,可快速、高效地筛选出与靶点作用的物质,解离时运用碳纳米纤维对与靶蛋白结合的活性成分进行解离,保持靶蛋白活性的同时还节省蛋白用量。因此,本研究将两种技术结合,快速实现对鸡血藤透皮成分全面分析及准确筛选出COX-2抑制剂,为今后透皮制剂的研究及RA的物质基础探究提供技术支持。研究主要内容与结果如下:1.利用二维碳纤维组分分离体系联用高分辨质谱分析鸡血藤提取液及透皮液,在5 min内检测出鸡血藤提取液47种成分,透皮液38种成分。其中具有药理活性的酚酸类及黄酮类的透过,为后续筛选COX-2潜在抑制剂奠定基础。2.基于前期多室电泳技术的应用,优化多室电泳中各参数,最终COX-2的电泳实验条件选择10 m M乙酸铵缓冲液、缓冲溶液p H=7.0、施加电压为14V、电泳时间为15 min。利用多室电泳技术从鸡血藤透皮液中筛选到5种COX-2潜在抑制剂,为美迪紫檀素、原儿茶酸、儿茶素、硝苯甲乙吡啶、肌醇,其中硝苯甲乙吡啶、肌醇为以前从未在鸡血藤中发现的化合物。3.利用计算机模拟软件Molecular Operating Environment 2019,将筛选出的5种潜在活性成分与COX-2进行分子对接,预测结果显示5种潜在活性成分均与COX-2以氢键或π键相互作用进行结合。本研究以二维碳纤维组分分离体系联用多室电泳技术为分析手段,快速分析出透皮液中微量成分,高效筛选出透皮液中活性成分,可为透皮贴剂的研究及RA的物质基础探究提供技术支持。