【摘 要】
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血凝素(HA)是禽流感病毒的两种表面糖蛋白之一,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用异硫氰酸胍法提取禽流感病毒分离株的SPF 鸡胚尿囊毒RNA,利用反转录-聚合酶链式反应
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血凝素(HA)是禽流感病毒的两种表面糖蛋白之一,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用异硫氰酸胍法提取禽流感病毒分离株的SPF 鸡胚尿囊毒RNA,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出禽流感病毒(H9 亚型)血凝素的cDNA。用UNIQ-10 柱式DNA 胶回收试剂盒回收纯化目的片段,通过T-A 连接将已加A 尾的PCR 产物连接到线状克隆载体pGEM-T easy vector,转化JM109 感受态细胞,在含氨苄青霉素的LB 平板上筛选阳性克隆。经PCR 扩增,进一步确证为目的片段,并对目的片段进行测序,结果获得3个毒株的HA 基因全长。与已知序列进行同源性比较,同源性最高的都可达98%,表明这些分离株的亲缘关系较近;系统发育分析表明,这三个毒株均属欧亚种系;通过血凝素裂解位点的氨基酸序列分析可知,三分离株的HA 切割位点上均未见到典型的高致病力毒株H5、H7 所具有的一系列碱性氨基酸,其排列顺序均为-PARSSRGLF-。所克隆的基因为禽流感病毒HA 基因芯片的研究奠定了基础。
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