【摘 要】
：
研究背景与目的:上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）即上皮细胞失去其功能及特征转化为间质细胞的表型,并且EMT在支气管哮喘（哮喘）气道重塑和气道纤维化发生发展过程中扮演着不可忽视的作用。Mi R-21作为参与肺部疾病病理生理学机制的主要微小RNA分子,已经有报道证实miR-21参与哮喘的进展以及人支气管平滑肌细胞增殖和迁移。并且也有关于miR-
论文部分内容阅读
研究背景与目的:上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）即上皮细胞失去其功能及特征转化为间质细胞的表型,并且EMT在支气管哮喘（哮喘）气道重塑和气道纤维化发生发展过程中扮演着不可忽视的作用。Mi R-21作为参与肺部疾病病理生理学机制的主要微小RNA分子,已经有报道证实miR-21参与哮喘的进展以及人支气管平滑肌细胞增殖和迁移。并且也有关于miR-21参与肺癌细胞增殖、侵袭、转移的相关报道。相关聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerases,PARPs]是由18个分子组成的一种DNA修复酶,并参与DNA的损伤修复与凋亡。PARP-1作为研究最广泛的一种亚型,被证实参与过敏原诱导的气道炎症和气道高反应性。虽然目前关于EMT促进哮喘恶化方面的机制研究已经取得了不少进展,但是目前关于miR-21/PARP-1促进人支气管上皮细胞发生EMT和迁移的机制并不清楚。本课题的目的是通过构建过表达miR-21或者PARP-1的16HBE细胞,使用PI3K抑制剂LY294002,进一步探讨miR-21/PARP-1影响人支气管上皮细胞16HBE上皮间质转化和迁移的分子机制,为今后研究和治疗哮喘提供新的思路。方法:通过脂质体瞬时转染法构建过表达或敲除miR-21和过表达PARP-1或沉默PARP-1的16HBE细胞模型,然后用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）实验和Western blot法检测miR-21和PARP-1的表达水平验证16HBE细胞模型是否成功构建。用Transwell实验检测16HBE细胞损伤修复情况。通过q RT-PCR和Western blot实验检测EMT相关标记蛋白（E-cadherin,E钙粘蛋白、N-cadherin,N钙粘蛋白、Vimentin,波形蛋白）以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K,p-AKT,tAKT）表达水平的变化。接下来通过生物信息学分析及双荧光素酶报告实验验证miR-21和PARP-1之间的靶向调节关系。在16HBE细胞中过表达miR-21的基础上转染PARP-1质粒和敲除miR-21的基础上转染PARP-1 si RNA,同时16HBE细胞在饥饿条件下提前与PI3K抑制剂LY294002共培养后转染miR-21 mimics和PARP-1 si RNA,进一步检测16HBE细胞的损伤修复情况、EMT相关标记蛋白和PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的变化。结果:在miR-21组或siPARP-1组中,16HBE细胞的迁移能力增加、Ncadherin蛋白、Vimentin蛋白上调和E-cadherin蛋白下调（P＜0.05）;而在miR-21 inhibitor组或PARP-1组中,16HBE细胞的迁移能力降低、N-cadherin蛋白、Vimentin蛋白下调和E-cadherin蛋白上调（P＜0.05）。转染miR-21mimics后的16HBE细胞PARP-1蛋白和m RNA的表达降低,并且PI3K蛋白、p-AKT蛋白表达上调（P＜0.05）;转染miR-21 inhibitor的16HBE细胞PARP-1蛋白和m RNA的表达升高,PI3K蛋白、p-AKT蛋白表达下调（P＜0.05）。生物信息学分析和双荧光素酶报告实验结果证实了miR-21与PARP-1 m RNA 3’UTR相结合并促进PARP-1 m RNA 3’UTR降解（P＜0.01）。PARP-1过表达能够逆转由miR-21诱导的16HBE细胞迁移能力的增加、miR-21上调的N-cadherin、Vimentin蛋白表达和下调的E-cadherin蛋白表达、miR-21上调的PI3K和p-AKT蛋白表达;在敲除miR-21的基础上沉默PARP-1,却得到相反的结果（P＜0.05）。16HBE细胞在饥饿条件下提前与PI3K抑制剂LY294002共培养后过表达miR-21或沉默PARP-1。与未处理组相比,LY294002处降低PI3K蛋白和p-AKT蛋白的表达,并且LY294002可以逆转由miR-21或沉默PARP-1诱导的16HBE细胞迁移能力的增加、miR-21或沉默PARP-1上调的N-cadherin和Vimentin蛋白的表达以及下调的E-cadherin蛋白的表达（P＜0.05）。结论:MiR-21靶向抑制PARP-1的表达促进人支气管上皮细胞16HBE上皮间质转化和迁移,PI3K/AKT信号通路的激活或许参与这一过程的发生,这或许可以作为治疗哮喘的靶点。
其他文献
目的:通过研究2型糖尿病患者糖尿病肾病与低血糖感知受损的相关性,来探讨低血糖感知受损的临床意义,为低血糖感知受损的预防及糖尿病肾病患者个体化血糖控制提供资料。方法:1.选取2020年11月至2022年1月于江苏省苏北人民医院住院的2型糖尿病患者359例。被纳入研究的患者需符合1999年世卫组织制定的2型糖尿病的诊断和分型标准。糖尿病肾病采用2021年《中国糖尿病肾脏疾病防治临床指南》中的诊断标准。
背景及目的:原发性干燥综合征（Primary Sj（?）gren’s Syndrome,pSS）是一种主要以口干、眼干为临床特点的结缔组织病,会引起全身多器官、多系统受累,包括关节受累、血液系统受累、肺脏受累、肾脏受累等。关节症状是pSS患者常见的腺外表现之一,患者常表现为多关节疼痛,一部分患者会出现关节肿痛或在影像学检查中发现滑膜增生、关节腔积液、骨质破坏等关节炎的表现。现有研究对合并关节炎的p
目的:通过对急性心肌梗死患者临床资料进行分析,探讨影响冠状动脉侧支循环形成的因素及其对患者近期预后的影响。方法:选取2020年11月至2021年10月收入辽宁省人民医院并行冠状动脉造影（coronary angiography,CAG）,急性心肌梗死诊断明确者。将纳入的239例患者,于CAG评估冠状动脉侧支循环（coronary collateral circulation,CCC）,按Rentr
研究背景:动脉粥样硬化是冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的病理基础,由于血脂异常可独立触发例如氧化应激、炎症形成和内皮功能障碍等阶段,导致不稳定斑块破裂以及血小板附着与聚集,促使血凝块生成并产生血栓,最终引起血管闭塞,因此血脂异常在动脉粥样硬化演变过程中起重要作用。脂蛋白结合指数（LCI）是综合甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）4
目的:肺癌在各种恶性肿瘤的患病率和致死率排行中一直居高不下。同时在人们发病后确诊时,类型最多当属非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）。目前肺癌的早期检出能力和治疗效果仍有限。因此挖掘可靠的靶向分子以改善诊断效能和治疗效果仍是急需解决的问题。肿瘤微环境为肺癌的不断发展提供了重要帮助。因此本课题前期从肿瘤微环境相关基因中筛选出与肺腺癌预后密切相关的基因。并针
背景和目的:阿司匹林联合P2Y12抑制剂的双联抗血小板治疗（DAPT）是当前预防冠心病（CHD）患者经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后再发血栓性不良事件的主流方案。虽然长时间应用DAPT可使PCI术后的缺血事件显著减少,但会相应的增加患者的出血风险及治疗成本。业已证实,CHD患者PCI术后出血与不良预后明显相关,所以如何精准的识别CHD患者的相对缺血及出血风险是PCI术后DAPT的基石,这也是临床
目的:血液透析患者死亡率远高于一般人群,心血管疾病是血液透析患者主要的并发症和死亡原因,评估血液透析患者心血管疾病及死亡发生风险对临床决策非常必要。预测模型是一种可以综合多个危险因素从而更准确地评估某种结局发生风险的工具。为提高临床医生对血液透析患者死亡风险的预判能力,本研究将通过对维持性血液透析患者并发心血管事件及全因死亡危险因素的分析建立预测模型。方法:本研究回顾性纳入了2016年6月在北部战
目的:为了研究基于冠状动脉CT血管成像（coronary computed tomography angiography,CCTA）得出的Euro CTO（CASTLE）评分对冠状动脉慢性完全闭塞病变（chronic total occlusion,CTO）经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention,PCI）的预测价值,具体而言,即CASTLECTA
研究背景及目的根据2020年最新的全球癌症数据统计结果显示,胃癌被认为是世界上第五大最常见的恶性肿瘤和第四大恶性肿瘤死因,严重威胁人类健康。尽早的干预治疗可大幅提高胃癌患者的生存期。早期胃癌被定义为肿瘤病灶局限于粘膜层及粘膜下层,与淋巴结转移状态无关。内镜下粘膜剥离术作为一种微创治疗方法,已被广泛应用于早期胃癌的治疗中,但手术的可行性取决于患者淋巴结转移的实际状态。组织学类型被认为是可能在确立治疗
目的:通过生物信息学数据库分析结直肠癌肝转移（colorectal cancer liver metastasis,CRLM）的相关数据,探索与肝转移高度相关的关键基因,并探究其通路作用,为结直肠癌肝转移的早期诊断和治疗提供潜在的生物标志物和治疗靶点。方法:在基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus,GEO）中获取GSE77953和GSE68468的基因芯片信息,通过GE