【摘 要】
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目的:研究血管生成调节蛋白-2（Vasohibin-2,VASH2）在高浓度葡萄糖诱导血管生成中的表达及作用,证实阿托伐他汀（Atorvastatin）和波生坦（Bosentan）对糖尿病血管新生的影响,从而探讨其在糖尿病并发症预防中临床应用的前景,并通过Meta分析进一步评估波生坦对糖尿病血管病变患者作用效应,为波生坦治疗糖尿病提供循证医学依据。方法:建立人脐静脉内皮细胞培养模型,转染前将人脐静
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目的:研究血管生成调节蛋白-2（Vasohibin-2,VASH2）在高浓度葡萄糖诱导血管生成中的表达及作用,证实阿托伐他汀（Atorvastatin）和波生坦（Bosentan）对糖尿病血管新生的影响,从而探讨其在糖尿病并发症预防中临床应用的前景,并通过Meta分析进一步评估波生坦对糖尿病血管病变患者作用效应,为波生坦治疗糖尿病提供循证医学依据。方法:建立人脐静脉内皮细胞培养模型,转染前将人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）分为3组:正常对照组（CG组）、高糖组（HG组）、甘露醇组（GG组）。用瞬时转染的方法,将VASH2阴性对照质粒、si-VASH2分别转染至高糖诱导HUVECs,分别命名为si-NC组、si-VASH2组,未经处理的细胞命名为空白组。采用q RT-PCR法检测各组VASH2与其他血管生成相关因子表达;用小管形成实验检测HUVECs体外小管形成能力;MTT法检测HUVECs增殖情况;Transwell法检测HUVECs迁移能力。药物实验将HUVECs分为4组:正常对照组（NG组）、高糖组（HG组）、高糖+阿托伐他汀组（HG+5ummol/L AT）、高糖+波生坦组（HG+0.1umol/L Bo）。采用q RT-PCR法检测各组VASH2与血管生成相关因子表达;小管形成实验检测HUVECs体外小管形成能力;Transwell法检测HUVECs迁移能力。通过检索Medline、Pub Med、EMBASE、CBM、中国知网、万方、维普、学术会议资料和学位论文等数据库,全面收集关于糖尿病与波生坦治疗相关的RCT、队列研究和病例对照文献,确定波生坦对糖尿病患者作用效应。检索时限均为建库至2019年5月,由2位研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险应用Stata 11.0软件进行Meta分析。结果:转染前,正常对照组、甘露醇组、高糖组HUVECs中VASH2基因表达分别为1.00±0.06,1.18±0.14,2.81±0.12,高糖组与正常对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。转染后,空白组、si-NC组、si-VASH2组VASH2基因表达水平分别为1.00±0.06,0.81±0.14,0.06±0.00;这3组的VEGFR2基因表达水平分别为1.00±0.02,0.96±0.18,0.20±0.03。与空白组及si-NC组比较,si-VASH2组VASH2、VEGHR2均有统计学意义（P＜0.05）。在48 h,空白组、si-NC组、si-VASH2组的HUVECs增殖率分别为（20.34±6.74）%,（20.65±6.75）%,（5.53±1.51）%。转染后的3项指标,si-VASH2组与空白组和si-NC组比较,差异均具有统计学意义（均P＜0.05）。加药后,NC组、HG组、HG+5ummol/L AT组、HG+0.5umol/L Bo组VASH2基因表达水平分别是1.00±0.06、3.40±0.09、1.05±0.04、2.74±0.18,VEGFA基因表达水平分别是1.01±0.01、2.55±0.04、0.12±0.01、0.19±0.04,VEGFR2基因表达水平分别是1.00±0.06、2.07±0.3、0.37±0.11、0.13±0.00,NC组、HG+5ummol/L AT组、HG+0.5umol/L Bo组和HG组比较,以上因子差异均具有统计学意义（均P＜0.05）。通过检索数据库总共有10项波生坦对糖尿病作用效应相关研究:包括3404例波生坦对糖尿病患者和6473例对照组,Meta分析结果显示,波生坦对糖尿病血管病变相关患病风险具有良好的控制作用,随机效应模型显性（OR=1.384,95%CI 1.062-1.804）,共显性（OR=1.232,95%CI 1.002-1.515）,隐性（OR=1.246,95%CI 0.912-1.703）。波生坦对糖尿病固定效应模型显性（OR=1.653,95%CI 1.416-1.930）和共显性（OR=1.525,95%CI 1.350-1.723）的敏感性。5项RCT描述了波生坦与糖尿病血管病变的预防作用,波生坦对糖尿病血管病变均具有预防作用价值。结论:高糖作用可促进血管生成,而VASH2在高糖诱导HUVECs血管生成中的表达较正常对照组明显增加,干扰VASH2表达及分别加入阿托伐他汀或波生坦均可抑制高糖诱导后血管生成相关因子的表达进而参与血管生成过程。通过Meta分析得出波生坦对糖尿病具有良好的疗效,且不良反应少,但纳入研究质量偏低,未来需要更严谨更大样本的研究以证实此结论。
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