实验背景和目的发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）是一种蜱传单负链RNA病毒,可导致SFTS,病死率为6.18%-27%。自噬是一个进化上保守的过程,通过降解一些损坏的蛋白或细胞器来维持宿主体内平衡。当不同病毒侵入细胞时,自噬可以发挥抗病毒反应。我们课题组研究发现SFTSV感染的靶细胞主要是脾脏网状纤维细胞（FRCs）,表明FRCs的病毒感染在致重症和死亡中发挥重要作用。因此,探究SFTSV感染后,脾脏FRCs自噬情况和机制,有助于在主要靶细胞水平揭示抗病毒反应和病毒逃避机制。实验方法在本研究中,我们在体外建立了能被SFTSV感染的靶细胞FRCs细胞系,研究SFTSV感染FRCs靶细胞,并诱导细胞自噬机制。SFTSV感染FRCs后,实时荧光定量PCR检测不同时间点病毒复制的病毒载量,Western blot检测不同时间点自噬水平的变化。体外构建SFTSV的S片段的非结构蛋白NSs和核衣壳蛋白NP的真核表达质粒,即pCAGGS-HA-NSs和pCAGGS-HA-NP。Western blot、实时荧光定量PCR和免疫荧光方法用于SFTSV、灭活的SFTSV感染或病毒NSs和NP蛋白质粒转染FRCs细胞后自噬水平的变化趋势研究。Western blot和共聚焦显微技术用于检测SFTSV感染或病毒NSs和NP蛋白导致自噬通量改变,进一步研究自噬的作用机制。我们继续从自噬途径中研究SFTSV的蛋白质粒转染FRCs调控自噬的作用。Western blot和免疫荧光用于研究SFTSV的蛋白质粒pCAGGS-HANSs和pCAGGS-HA-NP通过调控自噬信号通路ERK1/2-mTOR如何影响自噬。实验结果我们发现,在SFTSV感染FRCs后,病毒载量SFTSV感染8h后病毒载量明显增加,病毒快速复制。病毒感染后,不同时间点自噬水平是动态变化的,在病毒感染后8h、12h和24h,FRCs的自噬水平升高,但在感染后48h和72h,自噬水平明显下降。热灭活的SFTSV感染FRCs 12h后,自噬水平升高。此外,SFTSV的质粒pCAGGS-HA-NSs和pCAGGS-HA-NP转染FRCs后,在体外成功表达,并能在转染24h时诱导自噬的发生。研究结果表明SFTSV病毒感染12h或者病毒蛋白转染FRCs 24h之后,自噬通量增加,SFTSV与NP蛋白分别与自噬标志物LC3共定位。进一步进行自噬信号通路研究,我们的结果显示,NSs和NP蛋白质粒转染FRCs细胞后,ERK1/2磷酸化水平升高,mTOR磷酸化水平降低。加入通路抑制剂U0126后,ERK1/2磷酸化水平降低,mTOR磷酸化水平升高,且自噬水平降低。实验结论总而言之,我们在FRCs中研究的由病毒引起的自噬主要发生在病毒感染早期升高,而晚期下降。研究结果表明SFTSV和热灭活的SFTSV在感染早期以及SFTSV的蛋白质粒转染后24h均诱导自噬水平增加。并且SFTSV的NSs和NP蛋白质粒转染后可以通过调控ERK1/2-mTOR信号通路,从而影响自噬。这些发现提示,SFTSV感染靶细胞FRCs后,在感染早期阶段FRCs出现自噬,随着感染时间的延长,自噬作用消失。这些研究结果对后续进行发病机制的研究和自噬对病毒复制和病毒感染的免疫反应中的作用奠定基础。