论文部分内容阅读
目的
本研究筛选李家庚教授辨治肺系疾病(肺癌、慢性支气管炎、过敏性鼻炎)的病案，运用数据挖掘方法探究药组药对的配伍规律，提炼李家庚教授的遣方用药特色和学术思想,并通过网络药理学和实验研究对数据挖掘肺癌药对进行验证，以期更准确地将数据挖掘得到的临证经验应用于今后的临床实践中，并为后续研究打开思路。
方法
1.筛选李家庚教授2016-2019年于湖北省中医院凤凰门诊和湖北中医药大学国医堂的门诊病案，使用通过Access2010数据库开发的病案录入系统，将筛选后的病案进行录入并对录入后的数据进行清洗整理，将清洗后的数据导入到Weka3.6数据挖掘软件中，采用频数分析、关联规则、聚类分析等方法进行数据挖掘，再使用Pajek2.0复杂网络软件以节点大小区分频次高低，以节点颜色区分药物功效，以关联规则的药对分析结果为基础计算节点连线参数，以聚类分析结果作为核心圈药物来绘制复杂网络图。
2.选取薏苡仁-威灵仙药对作为研究对象，以“薏苡仁”、“威灵仙”为关键词，检索TCMSP数据库中二者有效成份及其作用靶点，并获取有效成份靶点的基因。以“lungcancer”为关键词检索UinProt数据库、GeneCards数据库、DrugBank数据库和TTD数据库中肺癌相关基因及标靶，剔除重复的基因和标靶，获取疾病靶点的基因。通过R软件将药物有效成份靶点和疾病靶点进行映射，以获取薏苡仁、威灵仙干预肺癌的可能靶点。将有效成份靶点和肺癌相关靶点导入“成分-靶点”网络构建工具Cytoscape3.7.2中，以构建薏苡仁-威灵仙和靶点的网络图，并以不同形状和颜色的节点(node)表示药物的有效成份和疾病靶点。将薏苡仁、威灵仙有效成份干预肺癌的靶点导入STRING数据库中获取PPI网络图，选取STRING数据库中“Multipleproteins”功能，并将种属设置为“homo
sapiens”。勾选PPI网络图中“hidedisconnectednodesinthenetwork”选项，将“minimumrequiredinteractionscore”的数值设置为0.4，最后导出PPI图和“string_interactions”文件。选取“string_interactions”文件中富集在前30的核心蛋白，导入到DAVID数据库，将种属设置为“homosapiens”，进行GO富集和KEGG富集分析。
3.选取小鼠75只，在其右侧腋窝下接种Lewis瘤细胞，0.2mL/只。移植瘤细胞4~5天后，观察腋窝下肿瘤。选取生长状态良好且右侧腋窝下肿瘤体积约为100mm3的小鼠进行分组，共分为5组，即模型(Model， MOD)组、薏苡仁-威灵仙药对低剂量(Yiyiren-Weilingxian，YW-L)组、薏苡仁-威灵仙药对中剂量(Yiyiren-Weilingxian，YW-M)组、薏苡仁-威灵仙药对高剂量(Yiyiren-Weilingxian，YW-M)组和环磷酰胺
(Cyclophosphamide，CTX)组，每组15只。以薏苡仁20g、威灵仙15g制作水煎液，并浓缩成每毫升含生药0.45g的浓缩液备用。MOD组给予20mL/kg/d的生理盐水灌胃；CTX组给予30mg/kg/d的环磷酰胺灌胃；YW-L组给予4.55g/kg/d的薏苡仁和威灵仙浓缩水溶液灌胃；YW-M组给予9.1g/kg/d薏苡仁和威灵仙浓缩水溶液灌胃；YW-H组给予18.2g/kg/d薏苡仁和威灵仙浓缩水溶液灌胃；上述给药总体积均为20mL/kg。各组连续灌胃30d，每日1次。灌胃结束后进行取材，小心打开小鼠胸腔，摘取肺部肿瘤称重，剪取部分肿瘤组织于4%多聚甲醛溶液中固定，以备进行HE染色、Tunel染色和免疫组化检测。剩余部分肿瘤组织，置于液氮保存以备进行Real-timePCR及WesternBlot实验检测。
结果
1.李家庚教授辨治肺系疾病临证规律
本研究筛选出李家庚教授2016-2019年期间诊治的肺系疾病病案共653例(肺癌207例、慢性支气管炎244例、过敏性鼻炎202例)，男性有314例，占总数的48.1%，女性有339例，占总数的51.9%。
李教授辨治肺癌的常见证型有阴虚毒热证、痰浊壅肺证、肺郁痰瘀证、气滞血瘀证、气阴两虚证。核心处方有：桑杏汤加减，治疗阴虚毒热证；止嗽散合三拗汤化裁，治疗痰浊壅肺证；柴胡疏肝散化裁，治疗肺郁痰瘀证；四物汤化裁，治疗气滞血瘀证；生脉散合止嗽散化裁，治疗气阴两虚证。常用的核心药对有：白花蛇舌草配重楼长于清热解毒抗肿瘤；款冬花配蒸百部、炙麻黄配杏仁、苏叶配杏仁长于宣肺止咳平喘；荆芥配防风、藿香配防风长于祛风解表；薏苡仁配威灵仙长于消肿散结；丹参配赤芍、丹参配白芍、丹参配炒山楂养血活血之用；陈皮配炒山楂长于行气活血。
李教授辨治慢性支气管炎的常见证型有风寒袭肺证、风热犯肺证、痰热壅肺证、肝火犯肺证、肺脾气虚证、肾阳不足证。核心处方有：三拗汤加减，治疗风寒袭肺证；银翘散加减，治疗风热犯肺证；黄芩汤合止嗽散加减，治疗痰热壅肺证；黛蛤散化裁，治疗肝火犯肺证；四君子汤化裁，治疗肺脾气虚证；真武汤化裁，治疗肾阳不足证。常用的核心药对有：款冬花配蒸百部、炙麻黄配杏仁长于止咳化痰宣肺平喘；荆芥配防风、藿香配防风、藿香配荆芥长于化湿解表散寒；金银花配连翘、蒲公英配连翘长于清热解表；丹参配赤芍、丹参配川芎长于养血活血；葛根配钩藤长于平肝息风；炒麦芽配炒谷芽长于消食和胃。
李教授辨治过敏性鼻炎的常见证型有肺气虚寒证、肺经蕴热证、肺脾气虚证、肝肺不和证、肾阳不足证。核心处方有：荆防败毒散合藿香正气散加减，治疗肺气虚寒证；银翘散合苍耳子散加减，治疗肺经蕴热证；四君子汤合荆防败毒散加减，治疗肺脾气虚证；柴胡疏肝散化裁，治疗肝肺不和证；真武汤化裁，治疗肾阳不足证。常用的核心药对有：苍耳子配辛夷花、白芷配辛夷花、白芷配苍耳子长于通鼻窍；荆芥配防风、藿香配佩兰长于化湿解表散寒；金银花配连翘、板蓝根配连翘、板蓝根配金银花、蒲公英配连翘、蒲公英配金银花长于清热解表；炒枳壳配制香附长于疏肝行气；白芍配丹参长于养血活血等。
李教授辨治肺系疾病用药情况为：清热药常用赤芍、玄参、连翘、白花蛇舌草、重楼、黄芩、金银花等，补虚药常用黄芪、白芍、炒白术、麦冬、太子参、仙灵脾、生地等，解表药常用荆芥、防风、苏叶、白芷、桑叶、葛根等，化痰止咳平喘药常用法半夏、杏仁、炙麻黄、款冬花、蒸百部、桔梗、前胡等，消食药常用炒山楂、炒麦芽、炒谷芽、炒鸡内金、炒神曲，活血化瘀药常用丹参、川芎、延胡索、炒莪术、鸡血藤等，理气药常用陈皮、制香附、炒枳壳、薤白、佛手等，化湿药常用藿香、佩兰、砂仁、厚朴、苍术，利水渗湿药常用茯苓、薏苡仁、泽泻、车前草、金钱草等，平肝息风药常用炒地龙、全蝎、钩藤、煅牡蛎、制僵蚕等，收涩药常用五味子、乌梅、浮小麦、海螵蛸、山茱萸，安神药常用茯神、炙远志、煅龙骨、合欢皮、酸枣仁，祛风湿药常用威灵仙、桑枝、桑寄生、独活等，止血药常用白茅根、仙鹤草、白及、侧柏炭、茜草等，另外还常用开窍药石菖蒲、泻下药火麻仁和郁李仁以及攻毒杀虫止痒药地肤子。
2.基于网络药理学的薏苡仁-威灵仙药对抗肺癌机制研究
TCMSP数据库显示薏苡仁和威灵仙有效成份分别有9个和11个，薏苡仁干预肺癌的有效成份有6个，威灵仙有3个，薏苡仁在薏苡仁-威灵仙药对干预肺癌中居于主导地位，“成分-靶点”网络图显示薏苡仁-威灵仙药对干预肺癌有效成份为Stigmasterol(豆甾醇)、beta-sitosterol(β-谷甾醇)、Sitosterolalpha1(谷甾醇α1)；PPI网络图显示ADRA2A、CSAP3、JUN、MAOA、ADRA1B、SLC6A4、HSP90AA1、MAOB、PTSG2、ADRA1A为薏苡仁-威灵仙干预肺癌的核心靶基因；KEGG富集显示薏苡仁-威灵仙干预肺癌主要通过调节PI3K-AKT信号通路、钙(calcium)信号通路、雌激素(Estrogen)信号通路、p53信号通路、IL-17信号通路、AGE-RAGE信号通路。
3.薏苡仁-威灵仙药对对Lewis肺癌小鼠的抗癌作用及机制研究
小鼠瘤重及抑瘤率结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中瘤重减轻(P＜0.01，P＜0.05)，抑瘤率增加。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中瘤重减轻(P＜0.05)，而抑瘤率增加。
HE染色结果显示，MOD组瘤体中细胞排列紊乱且紧密，可见变形坏死的细胞，部分区域有明显的核固缩。YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组瘤体中细胞排列松散，细胞间隙增大，有大量变形和坏死的细胞，核固缩较为明显，部分瘤体边缘有淋巴细胞浸润，其中CTX组瘤体中细胞变形坏死最为明显。
Tunel染色结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中绿色荧光数量和密度增加。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中绿色荧光数量和密度增加。与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织细胞凋亡指数增加(P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织细胞凋亡指数增加(P＜0.05)。
Bcl-2、Bax和Caspase-3免疫组化实验结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的阳性细胞数增加(P＜0.05,P＜0.01)，而Bcl-2的阳性细胞数减少(P＜0.05,P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的阳性细胞数增加(P＜0.01)，而Bcl-2的阳性细胞数减少(P＜0.01)。
Real-timePCR结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的mRNA表达水平增加(P＜0.05,P＜0.01)，而Bcl-2的mRNA表达水平减少(P＜0.05,P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的mRNA表达水平增加(P＜0.01)，而Bcl-2的mRNA表达水平减少(P＜0.01)。
WesternBlot实验结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的蛋白表达水平增加(P＜0.05,P＜0.01)，而Bcl-2的蛋白表达水平减少(P＜0.05,P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的蛋白表达水平增加(P＜0.05,P＜0.01)，而Bcl-2的蛋白表达水平减少(P＜0.05,P＜0.01)；与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中p-PI3K-Tyr607、p-AKT-Thr308和p-mTOR-Ser2448的蛋白表达水平均有不同程度减少(P＜0.05,P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中p-PI3K-Tyr607、p-AKT-Thr308和p-mTOR-Ser2448蛋白表达水平均有不同程度减少(P＜0.05,P＜0.01)。
结论
1.李家庚教授辨治肺系疾病临证经验包括：①重视固护卫气；②重视调畅气机，从肝治肺；③重视从痰瘀论治肺病；④重视固护脾胃；⑤灵活施药，轻灵平稳。李家庚教授辨治肺系疾病的学术思想包括：①辨证辨病结合，相辅相成；②经方时方合用，相得益彰。
2.薏苡仁-威灵仙药对主要是通过调节炎症、糖代谢和雌激素等途径干预肺癌。薏苡仁-威灵仙药对干预肺癌具有多途径和多层次的特点，一方面可以直接调节细胞周期，另一方面也可通过调节炎症和雌激素水平而干预肿瘤的发生和发展。
3.薏苡仁-威灵仙药对具有抑制Lewis肺癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用，其机制与其抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活性有关。
本研究筛选李家庚教授辨治肺系疾病(肺癌、慢性支气管炎、过敏性鼻炎)的病案，运用数据挖掘方法探究药组药对的配伍规律，提炼李家庚教授的遣方用药特色和学术思想,并通过网络药理学和实验研究对数据挖掘肺癌药对进行验证，以期更准确地将数据挖掘得到的临证经验应用于今后的临床实践中，并为后续研究打开思路。
方法
1.筛选李家庚教授2016-2019年于湖北省中医院凤凰门诊和湖北中医药大学国医堂的门诊病案，使用通过Access2010数据库开发的病案录入系统，将筛选后的病案进行录入并对录入后的数据进行清洗整理，将清洗后的数据导入到Weka3.6数据挖掘软件中，采用频数分析、关联规则、聚类分析等方法进行数据挖掘，再使用Pajek2.0复杂网络软件以节点大小区分频次高低，以节点颜色区分药物功效，以关联规则的药对分析结果为基础计算节点连线参数，以聚类分析结果作为核心圈药物来绘制复杂网络图。
2.选取薏苡仁-威灵仙药对作为研究对象，以“薏苡仁”、“威灵仙”为关键词，检索TCMSP数据库中二者有效成份及其作用靶点，并获取有效成份靶点的基因。以“lungcancer”为关键词检索UinProt数据库、GeneCards数据库、DrugBank数据库和TTD数据库中肺癌相关基因及标靶，剔除重复的基因和标靶，获取疾病靶点的基因。通过R软件将药物有效成份靶点和疾病靶点进行映射，以获取薏苡仁、威灵仙干预肺癌的可能靶点。将有效成份靶点和肺癌相关靶点导入“成分-靶点”网络构建工具Cytoscape3.7.2中，以构建薏苡仁-威灵仙和靶点的网络图，并以不同形状和颜色的节点(node)表示药物的有效成份和疾病靶点。将薏苡仁、威灵仙有效成份干预肺癌的靶点导入STRING数据库中获取PPI网络图，选取STRING数据库中“Multipleproteins”功能，并将种属设置为“homo
sapiens”。勾选PPI网络图中“hidedisconnectednodesinthenetwork”选项，将“minimumrequiredinteractionscore”的数值设置为0.4，最后导出PPI图和“string_interactions”文件。选取“string_interactions”文件中富集在前30的核心蛋白，导入到DAVID数据库，将种属设置为“homosapiens”，进行GO富集和KEGG富集分析。
3.选取小鼠75只，在其右侧腋窝下接种Lewis瘤细胞，0.2mL/只。移植瘤细胞4~5天后，观察腋窝下肿瘤。选取生长状态良好且右侧腋窝下肿瘤体积约为100mm3的小鼠进行分组，共分为5组，即模型(Model， MOD)组、薏苡仁-威灵仙药对低剂量(Yiyiren-Weilingxian，YW-L)组、薏苡仁-威灵仙药对中剂量(Yiyiren-Weilingxian，YW-M)组、薏苡仁-威灵仙药对高剂量(Yiyiren-Weilingxian，YW-M)组和环磷酰胺
(Cyclophosphamide，CTX)组，每组15只。以薏苡仁20g、威灵仙15g制作水煎液，并浓缩成每毫升含生药0.45g的浓缩液备用。MOD组给予20mL/kg/d的生理盐水灌胃；CTX组给予30mg/kg/d的环磷酰胺灌胃；YW-L组给予4.55g/kg/d的薏苡仁和威灵仙浓缩水溶液灌胃；YW-M组给予9.1g/kg/d薏苡仁和威灵仙浓缩水溶液灌胃；YW-H组给予18.2g/kg/d薏苡仁和威灵仙浓缩水溶液灌胃；上述给药总体积均为20mL/kg。各组连续灌胃30d，每日1次。灌胃结束后进行取材，小心打开小鼠胸腔，摘取肺部肿瘤称重，剪取部分肿瘤组织于4%多聚甲醛溶液中固定，以备进行HE染色、Tunel染色和免疫组化检测。剩余部分肿瘤组织，置于液氮保存以备进行Real-timePCR及WesternBlot实验检测。
结果
1.李家庚教授辨治肺系疾病临证规律
本研究筛选出李家庚教授2016-2019年期间诊治的肺系疾病病案共653例(肺癌207例、慢性支气管炎244例、过敏性鼻炎202例)，男性有314例，占总数的48.1%，女性有339例，占总数的51.9%。
李教授辨治肺癌的常见证型有阴虚毒热证、痰浊壅肺证、肺郁痰瘀证、气滞血瘀证、气阴两虚证。核心处方有：桑杏汤加减，治疗阴虚毒热证；止嗽散合三拗汤化裁，治疗痰浊壅肺证；柴胡疏肝散化裁，治疗肺郁痰瘀证；四物汤化裁，治疗气滞血瘀证；生脉散合止嗽散化裁，治疗气阴两虚证。常用的核心药对有：白花蛇舌草配重楼长于清热解毒抗肿瘤；款冬花配蒸百部、炙麻黄配杏仁、苏叶配杏仁长于宣肺止咳平喘；荆芥配防风、藿香配防风长于祛风解表；薏苡仁配威灵仙长于消肿散结；丹参配赤芍、丹参配白芍、丹参配炒山楂养血活血之用；陈皮配炒山楂长于行气活血。
李教授辨治慢性支气管炎的常见证型有风寒袭肺证、风热犯肺证、痰热壅肺证、肝火犯肺证、肺脾气虚证、肾阳不足证。核心处方有：三拗汤加减，治疗风寒袭肺证；银翘散加减，治疗风热犯肺证；黄芩汤合止嗽散加减，治疗痰热壅肺证；黛蛤散化裁，治疗肝火犯肺证；四君子汤化裁，治疗肺脾气虚证；真武汤化裁，治疗肾阳不足证。常用的核心药对有：款冬花配蒸百部、炙麻黄配杏仁长于止咳化痰宣肺平喘；荆芥配防风、藿香配防风、藿香配荆芥长于化湿解表散寒；金银花配连翘、蒲公英配连翘长于清热解表；丹参配赤芍、丹参配川芎长于养血活血；葛根配钩藤长于平肝息风；炒麦芽配炒谷芽长于消食和胃。
李教授辨治过敏性鼻炎的常见证型有肺气虚寒证、肺经蕴热证、肺脾气虚证、肝肺不和证、肾阳不足证。核心处方有：荆防败毒散合藿香正气散加减，治疗肺气虚寒证；银翘散合苍耳子散加减，治疗肺经蕴热证；四君子汤合荆防败毒散加减，治疗肺脾气虚证；柴胡疏肝散化裁，治疗肝肺不和证；真武汤化裁，治疗肾阳不足证。常用的核心药对有：苍耳子配辛夷花、白芷配辛夷花、白芷配苍耳子长于通鼻窍；荆芥配防风、藿香配佩兰长于化湿解表散寒；金银花配连翘、板蓝根配连翘、板蓝根配金银花、蒲公英配连翘、蒲公英配金银花长于清热解表；炒枳壳配制香附长于疏肝行气；白芍配丹参长于养血活血等。
李教授辨治肺系疾病用药情况为：清热药常用赤芍、玄参、连翘、白花蛇舌草、重楼、黄芩、金银花等，补虚药常用黄芪、白芍、炒白术、麦冬、太子参、仙灵脾、生地等，解表药常用荆芥、防风、苏叶、白芷、桑叶、葛根等，化痰止咳平喘药常用法半夏、杏仁、炙麻黄、款冬花、蒸百部、桔梗、前胡等，消食药常用炒山楂、炒麦芽、炒谷芽、炒鸡内金、炒神曲，活血化瘀药常用丹参、川芎、延胡索、炒莪术、鸡血藤等，理气药常用陈皮、制香附、炒枳壳、薤白、佛手等，化湿药常用藿香、佩兰、砂仁、厚朴、苍术，利水渗湿药常用茯苓、薏苡仁、泽泻、车前草、金钱草等，平肝息风药常用炒地龙、全蝎、钩藤、煅牡蛎、制僵蚕等，收涩药常用五味子、乌梅、浮小麦、海螵蛸、山茱萸，安神药常用茯神、炙远志、煅龙骨、合欢皮、酸枣仁，祛风湿药常用威灵仙、桑枝、桑寄生、独活等，止血药常用白茅根、仙鹤草、白及、侧柏炭、茜草等，另外还常用开窍药石菖蒲、泻下药火麻仁和郁李仁以及攻毒杀虫止痒药地肤子。
2.基于网络药理学的薏苡仁-威灵仙药对抗肺癌机制研究
TCMSP数据库显示薏苡仁和威灵仙有效成份分别有9个和11个，薏苡仁干预肺癌的有效成份有6个，威灵仙有3个，薏苡仁在薏苡仁-威灵仙药对干预肺癌中居于主导地位，“成分-靶点”网络图显示薏苡仁-威灵仙药对干预肺癌有效成份为Stigmasterol(豆甾醇)、beta-sitosterol(β-谷甾醇)、Sitosterolalpha1(谷甾醇α1)；PPI网络图显示ADRA2A、CSAP3、JUN、MAOA、ADRA1B、SLC6A4、HSP90AA1、MAOB、PTSG2、ADRA1A为薏苡仁-威灵仙干预肺癌的核心靶基因；KEGG富集显示薏苡仁-威灵仙干预肺癌主要通过调节PI3K-AKT信号通路、钙(calcium)信号通路、雌激素(Estrogen)信号通路、p53信号通路、IL-17信号通路、AGE-RAGE信号通路。
3.薏苡仁-威灵仙药对对Lewis肺癌小鼠的抗癌作用及机制研究
小鼠瘤重及抑瘤率结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中瘤重减轻(P＜0.01，P＜0.05)，抑瘤率增加。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中瘤重减轻(P＜0.05)，而抑瘤率增加。
HE染色结果显示，MOD组瘤体中细胞排列紊乱且紧密，可见变形坏死的细胞，部分区域有明显的核固缩。YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组瘤体中细胞排列松散，细胞间隙增大，有大量变形和坏死的细胞，核固缩较为明显，部分瘤体边缘有淋巴细胞浸润，其中CTX组瘤体中细胞变形坏死最为明显。
Tunel染色结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中绿色荧光数量和密度增加。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中绿色荧光数量和密度增加。与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织细胞凋亡指数增加(P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织细胞凋亡指数增加(P＜0.05)。
Bcl-2、Bax和Caspase-3免疫组化实验结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的阳性细胞数增加(P＜0.05,P＜0.01)，而Bcl-2的阳性细胞数减少(P＜0.05,P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的阳性细胞数增加(P＜0.01)，而Bcl-2的阳性细胞数减少(P＜0.01)。
Real-timePCR结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的mRNA表达水平增加(P＜0.05,P＜0.01)，而Bcl-2的mRNA表达水平减少(P＜0.05,P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的mRNA表达水平增加(P＜0.01)，而Bcl-2的mRNA表达水平减少(P＜0.01)。
WesternBlot实验结果显示，与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的蛋白表达水平增加(P＜0.05,P＜0.01)，而Bcl-2的蛋白表达水平减少(P＜0.05,P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中Bax和Caspase-3的蛋白表达水平增加(P＜0.05,P＜0.01)，而Bcl-2的蛋白表达水平减少(P＜0.05,P＜0.01)；与MOD组比较，YW-L组、YW-M组、YW-H组和CTX组小鼠肺组织中p-PI3K-Tyr607、p-AKT-Thr308和p-mTOR-Ser2448的蛋白表达水平均有不同程度减少(P＜0.05,P＜0.01)。与YW-L组比较，CTX组小鼠肺组织中p-PI3K-Tyr607、p-AKT-Thr308和p-mTOR-Ser2448蛋白表达水平均有不同程度减少(P＜0.05,P＜0.01)。
结论
1.李家庚教授辨治肺系疾病临证经验包括：①重视固护卫气；②重视调畅气机，从肝治肺；③重视从痰瘀论治肺病；④重视固护脾胃；⑤灵活施药，轻灵平稳。李家庚教授辨治肺系疾病的学术思想包括：①辨证辨病结合，相辅相成；②经方时方合用，相得益彰。
2.薏苡仁-威灵仙药对主要是通过调节炎症、糖代谢和雌激素等途径干预肺癌。薏苡仁-威灵仙药对干预肺癌具有多途径和多层次的特点，一方面可以直接调节细胞周期，另一方面也可通过调节炎症和雌激素水平而干预肿瘤的发生和发展。
3.薏苡仁-威灵仙药对具有抑制Lewis肺癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用，其机制与其抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活性有关。