【摘 要】
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该研究以南昆山毛叶茶、英红9号、福云6号三个茶树品种为实验材料,以茶叶咖啡碱合成代谢途径中的两个酶——N-甲基转移酶(NMT)和S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶为对象,进行基因克
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该研究以南昆山毛叶茶、英红9号、福云6号三个茶树品种为实验材料,以茶叶咖啡碱合成代谢途径中的两个酶——N-甲基转移酶(NMT)和S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶为对象,进行基因克隆的研究.N-甲基转移酶依赖SAM为甲基供体,催化嘌呤甲基化,是咖啡碱代谢合成中的关键酶.SAM是咖啡碱合成中的重要甲基供体,是由SAM合成酶催化L-甲硫氨酸和ATP生成.随着分子生物学的发展,克隆茶树中N-甲基转移酶、SAM合成酶基因,研究其在茶树咖啡碱代谢中的表达规律,对于通过遗传工程途径从分子水平上改造茶树品种,培育低咖啡碱茶树品种具有重要经济价值和实践意义.该研究主要得到以下结果:(1)英红9号N-甲基转移酶基因片段的获得.以英红9号基因组DNA为模板,进行PCR扩增,扩增后得到一个长为673bp的片段,编码65个氨基酸,其核苷酸序列与已在Genbank上登录的茶叶TCS1比对,同源性为96%,两者氨基酸序列的同源性为90%.(2)福云6号N-甲基转移酶基因片段的获得.分别以福云6号三个单株的mRNA为模板,利用RT-PCR扩增技术对N-甲基转移酶基因进行PCR扩增.(3)N-甲基转移酶基因保守结构域的分析.(4)南昆山毛叶茶SAM合成酶基因片段的获得.(5)英红9号SAM合成酶基因片段的获得.以英红9号基因组DNA为模板进行扩增,得到一个大小为602bp的片段,编码169个氨基酸.
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