野生型DNA聚合酶β转染对细胞应对交链孢霉酚损伤作用的影响

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背景及目的: DNA聚合酶β(DNA polymerase β,DNA po1β)是参与体内碱基切除修复(base excision repair,BER)过程的重要的损伤修复酶,其功能的正常发挥对维持细胞的正常进程和遗传的稳定性具有重要作用。DNA po1β主要修复自由基氧化或胞嘧啶和甲基胞嘧啶脱氨基等过程产生的DNA损伤,也能解决外源性因素如亚硝胺类产生的烷基化碱基,在DNA和RNA水平上进行损伤修复。正常细胞中,DNApo1β在整个细胞周期中都是低表达的,由于DNA po1β缺少3’-5’校读功能,是所有聚合酶中保真度最低的酶。高表达的DNA po1β可能扰乱细胞内的各种聚合酶类功能,参与其它DNA合成过程,并可导致NER过程的易错合成,因此会引起基因组的不稳定性,导致肿瘤的发生。研究发现,在多种肿瘤细胞和癌旁组织中发现DNA po1β基因突变及DNA po1β蛋白高表达。p53基因是最具代表性的抑癌基因,野生型p53蛋白在维持细胞正常生长、抑制恶性增殖中起着重要作用。交链孢霉酚(alternariol,AOH)是河南林州市食管癌高发区比较常见的一种霉菌毒素,能通过多种机制引起细胞癌变。本研究建立了高表达野生型DNA po1β的细胞系,并用AOH损伤细胞后,间接研究DNA po1β的损伤修复作用及与抑癌基因p53的关系,并为食管癌的病因学提供一定的资料。 方法: 将已构建的含野生型DNA po1β的绿色荧光真核表达载体pEGFP-C3-po1β用脂质体介导转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,通过荧光倒置显微镜观察转染基因在细胞中的表达。经交链孢霉酚作用48小时后,流
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