【摘 要】
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背景:牙齿发育依赖于多种转录因子,调节上皮与间充质细胞之间相互作用。转录因子TCF12为碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子家族成员,可与该家族另一成员转录因子TWIST1形成异源
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背景:牙齿发育依赖于多种转录因子,调节上皮与间充质细胞之间相互作用。转录因子TCF12为碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子家族成员,可与该家族另一成员转录因子TWIST1形成异源二聚体,而当TCF12突变,TCF12/TWIST1异源二聚体的量发生改变,将会对颅冠状缝发育产生巨大影响。除此之外,之前研究还揭示了 Twist1在牙齿形态发生、成牙本质细胞分化的过程中所扮演的重要角色。然而,截至目前,对Tcf12在成牙向分化、牙齿形态发生这一过程中作用的研究尚未有报道。目的:检测Tcf12在小鼠牙胚发育不同阶段的表达变化,揭示牙发育过程中,Tcf12对牙形态发生以及牙釉质形成的影响。方法:首先,我们采用原位杂交与免疫荧光这两种实验方法,观察分析Tcf12在牙形态发生过程中的表达变化。体外实验方面,我们选取了鼠的成釉细胞样细胞系(LS-8mouseameloblast cell line),进行细胞培养,分别将沉默、过表达Tcf12慢病毒载体经包装后产生的高感染力慢病毒颗粒感染LS-8细胞,然后进行细胞增殖与活性测定、实时定量PCR分析釉质形成相关基因表达以及Western blot测定BMP/Srmad信号通路相关性等实验。体内实验方面,我们将小鼠下颌第一磨牙牙胚从小鼠胚胎中分离,埋植入小鼠肾囊膜下,进行器官培养,将培养所获得的小鼠牙胚包埋、连续切片,进行苏木素伊红染色、免疫组织化学染色等后续实验。结果:1..Tcf12表达于小鼠牙胚发育全程,并呈时空变化。2.Tcf12在牙发育信号中心——釉结区域表达强烈。3.Tcfl2对釉质形成相关基因有调控作用,Tcf12沉默或过表达对釉质正常发育形成有影响。4.Tcf12表达量与BMP/Smad通路的pSmad1相关。结论:Tcfl2在牙形态发生过程中表达呈时空变化,对牙齿发育至关重要。Tcfl2作为釉质发育早期重要的转录因子,在釉结区域表达影响牙形态发生,其表达量与牙釉质形成密切相关。Tcf12可能通过作用于BMP/Smad信号通路影响牙发育过程。
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