【摘 要】
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目的:获得rhIL-15基因工程菌.方法:从肺癌细胞株A549中提取细胞总RNA、RT-PCR方法扩增出编码人IL-15成熟区基因的片段.该基因片段经限制性内切酶ECORⅠ、XhoⅠ双酶切后,插入
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目的:获得rhIL-15基因工程菌.方法:从肺癌细胞株A549中提取细胞总RNA、RT-PCR方法扩增出编码人IL-15成熟区基因的片段.该基因片段经限制性内切酶ECORⅠ、XhoⅠ双酶切后,插入融合表达质粒pGEX-4T-2的ECORⅠ、XhoⅠ酶切位点,从而构建成重组融合蛋白表达质粒.阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21而得到工程菌.结果:重组成粒插入片段的核酸序列测定与文献报导IL-15蛋白成熟区核酸序列一致.该工程菌所表达融合蛋白多数以包涵体形式存在,占菌体蛋白总量的39﹪.包涵体提纯后纯度可达80﹪以上,复性后纯化的rhIL-15蛋白经MTT法初步测定,具有促进CTLL-2细胞增殖能力.结论:获得了具有生物活性的rhIL-15高效表达菌株.
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