阿尔茨海默病（Alzheimerdisease,AD）是一种以渐进性认知能力衰退和行为损害为特征的最常见的蛋白质构象病。迄今为止,AD病因仍不明确,但它可能是多种因素综合作用的结果,如环境和遗传因素等。其中,淀粉样蛋白级联假说受到研究者广泛认可,该假说指出β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）的错误折叠和聚集并在脑内沉积是AD发病的主要因素。因此,开发针对Aβ聚集抑制剂的筛选方法并基于此开发抗Aβ聚集药物对于预防和缓解AD至关重要。本文首先基于报告蛋白β-内酰胺酶（β-lactamase,βlac）的结构特性和Aβ42聚集性质,将Aβ42通过甘氨酸和丝氨酸柔性多肽连接子插入到βlac的αβ和α两个结构域之间的196和197氨基酸残基之间,在大肠杆菌体内构建了 βlac-Aβ42三联体融合体系。该体系的基本原理为:若Aβ42聚集受到抑制,βlac两个结构域将重新作用在一起恢复βlac水解氨苄青霉素的能力,导致宿主菌能正常生长;相反,宿主菌将不能在含氨苄青霉素的培养基中存活。因此,该方法可用于Aβ聚集抑制剂的筛选。然后,在已知Aβ42聚集抑制剂EGCG、姜黄素和固绿作用下,通过斑点滴定、平板涂布和测定菌体浓度变化实验验证了该方法的有效性。结果表明,上述3种抑制剂通过抑制Aβ42聚集,使BL21-βlac-Aβ42菌株的抗药性得到恢复,从而能在含氨苄青霉素的培养基继续生长且允许宿主菌生长的最大稀释倍数增大,证明该方法具有在体内筛选Aβ聚集抑制剂的能力。随后,利用该体系筛选获得能抑制Aβ聚集的石莼多糖（ulvan）。结合常规的生物物理、化学和细胞毒性实验体外研究了 ulvan对Aβ40纤维化过程的抑制作用和对成熟纤维的解聚作用。硫黄素T荧光实验表明,ulvan能以浓度依赖性方式显著抑制Aβ40聚集,半数抑制浓度为0.62 mg/mL,强于现有聚集抑制剂二氢杨梅素等。同时ulvan能显著延长Aβ40聚集过程的延迟期,进一步表明ulvan能抑制Aβ40初级成核过程。利用原子力显微镜观察到2.00 mg/mL ulvan阻止Aβ40致密长纤维的形成,而是形成短棒状或不定型聚集体。圆二色光谱实验表明ulvan能有效阻止Aβ40从初始的无规则卷曲向β-折叠的构象转换。细胞毒性结果表明,ulvan能保护PC12细胞免受Aβ40聚集体诱导的细胞毒性作用。此外,利用DCFH-DA荧光探针发现ulvan能有效抑制Aβ40纤维化过程介导的细胞内活性氧的产生。上述体外实验结果进一步证明了基于βlac-Aβ42三联体融合体系的体内筛选方法能用于Aβ抑制剂的筛选。本研究表明βlac-Aβ42体内筛选方法的构建为抗AD药物的筛选指明了新的方向,ulvan抗淀粉样病变能力的发现为从海藻中开发出治疗AD的功能性食品成分提供了新的思路。