生姜精油对黑色素瘤细胞中黑色素作用及机理

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本研究用超临界CO2萃取生姜精油,并将20-100 μg/mL的生姜精油与小鼠B16黑色素瘤细胞共培24 h和48 h。测定生姜精油在B16黑色素瘤细胞中对细胞增殖、黑色素合成及抗氧化的作用,并研究生姜精油抑制黑色素合成的相关机制。具体研究内容与结果如下:(1)用MTT实验、细胞形态观察和流式细胞仪分析测定生姜精油对B16黑色素瘤细胞活力的影响。结果显示20-100 μg/mL的生姜精油可以显著降低B16黑色素瘤细胞的生存力,100 μg/mL生姜精油培养48 h后细胞出现结构不清晰和回缩的趋势,且细胞周期的结果显示生姜精油处理细胞24 h后,细胞周期发生阻塞。G0/G1期和G2/M期的细胞数量减少,而S期的细胞数量增多。表明生姜精油可以将B16黑色素瘤细胞周期阻截在G2/M期和S-G2期,从而抑制细胞的增殖。(2)黑色素实验结果表明20-100 μg/mL的生姜精油不仅可以降低细胞内黑色素的合成水平,还可以减少黑色素的转运和分泌;酪氨酸酶的测定结果显示生姜精油可以抑制细胞内酪氨酸酶的活性,表明生姜精油可以通过抑制细胞内酪氨酸酶的活性来减少黑色素的合成,并影响黑色素的转运。(3)以细胞内谷胱甘肽(GSH)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、脂质过氧化水平和活性氧(ROS)作为检测指标,研究生姜精油在B16黑色素瘤细胞中的抗氧化作用。结果显示20-100 μg/mL的生姜精油可以提高细胞内谷胱甘肽水平、超氧化物歧化酶活性和过氧化氢酶的活性,抑制细胞内的脂质过氧化、活性氧及胞外活性物质的产生,表明生姜精油在黑色素瘤细胞中具有一定的抗氧化作用,这也是生姜精油抑制黑色素合成的机制之一。(4)用免疫印迹法来测定生姜精油对黑色素生成相关蛋白的影响。结果表明20-80 μg/mL的生姜精油可以降低细胞内酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)、小眼球相关转录因子(MITF)和p38分裂素所激活的蛋白激酶(p38 MAPK)的表达水平,显示生姜精油可以通过抑制酪氨酸酶相关蛋白、小眼球相关转录因子和p38的表达来减少细胞内黑色素的合成。因此,本研究通过一系列的实验表明了生姜精油可以抑制黑色素瘤细胞的增殖,并通过控制酪氨酸酶活性、相关蛋白的表达和其抗氧化性来抑制黑色素的合成,可以作为一种潜在的美白剂用于食品工业和化妆品行业中。
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