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目的:本课题在前期实验研究基础上,以高脂饲料联合四环素腹腔注射制备大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,探讨化痰祛湿活血方对模型鼠ADPN/AMPK/ACC信号通路基因及蛋白的影响,揭示NASH发生发展中ADPN/AMPK/ACC信号通路作用机制,阐释化痰祛湿活血方防治NASH的作用机理,从基因和蛋白水平为NASH的中医药防治提供理论依据。方法:以多烯磷脂酰胆碱(易善复)胶囊为阳性对照,将72只SPF级SD雄性大鼠,随机分为空白组、模型组、对照组和化痰祛湿活血方高(高剂量组)、中(中剂量组)、低(低剂量组)剂量组,每组12只。喂养于IVC动物实验室内。空白组予基础饲料,其余5组均饲以高脂饲料(84%基础饲料+10%猪油+5%蛋黄粉+1%胆固醇)联合四环素(首次剂量10mg/100g·鼠重,二次至末次剂量7mg/100g·鼠重。)腹腔注射造模。造模的第2周起,除空白组外,各组均按1ml/100g·d-1分别给予生理盐水及相应药物灌胃治疗处理。多烯磷脂酰胆碱胶囊剂量为0.0285g/100g·d-1。高、中、低剂量组分别将化痰祛湿活血方按5.04g/100g·d-1、2.52/100g·d-1、1.26/100g·d-1给药。根据每周鼠重变化调整药物剂量,第7周结束后取材,观察血清ALT、AST、TG、TC、GLU水平;取肝组织观察肝湿重、肝指数、病理组织学变化、测定肝匀浆FFA含量,免疫组化定位ADPN、AdipoR2蛋白表达分布;实时荧光定量PCR及ELISA测肝组织ADPN、AdipoR2、AMPK、ACC、CPT-1的基因蛋白表达。结果:1.与空白组比较,模型组肝湿重、肝指数、血清ALT、AST、TC、TG、GLU水平、肝匀浆FFA含量均有显著升高(P<0.01);ADPN/AMPK/ACC信号通路中肝组织ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1基因及蛋白表达均显著降低(P<0.01),ACC基因及蛋白显著升高(P<0.01);病理变化呈中重度脂肪变。2.与模型组比较,各用药组能有效降低肝指数,血清ALT、AST、TG、TC、GLU、肝匀浆FFA,其中以高剂量组疗效显著优于其他各用药组(P<0.01)。在ADPN/AMPK/ACC信号通路中,高剂量组能有效上调ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1基因及蛋白表达,下调ACC基因及蛋白,疗效优于其它各用药组(P<0.01)。3.与对照组相比,高剂量组疗效明显优于对照组;中剂量组降低肝指数,血清ALT、AST、TG、TC、GLU、肝匀浆FFA疗效与对照组基本相当(P>0.05),大致优于低剂量组。在ADPN/AMPK/ACC信号通路中,上调ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1基因及蛋白表达,下调ACC基因及蛋白,中剂量组与对照组在调控通路中的基因蛋白表达效果相当(P>0.05),且优于低剂量组。4. ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1却与鼠重、肝湿重、肝指数、ALT、AST、TG、TC、GLU、FFA、ACC呈现负相关。化痰祛湿活血方抗击NASH的作用与其剂量呈正相关。结论:1.本研究采用高脂餐饮食加四环素腹腔注射成功制备大鼠NASH模型。2.NASH形成和发展过程中,随着ADPN、AdipoR2、AMPK、CPT-1在组织间蛋白含量的减少,鼠重、肝湿重、肝指数、ALT、AST、TG、TC、GLU、FFA、ACC呈现升高的态势。3.化痰祛湿活血方能有效激活ADPN/AMPK/ACC通路基因及蛋白表达,使胆固醇及脂肪酸的合成原料下降,增加脂肪酸的β氧化,减少肝细胞脂肪沉积,减轻肝脏炎症。4.从疗效学指标与ADPN/AMPK/ACC通路基因和蛋白表达来看,化痰祛湿活血方高剂量的疗效优于多烯磷脂酰胆碱(易善复)胶囊胶囊。5.随着剂量的增加,化痰祛湿活血方与疗效存在量效关系,疗效次序即高剂量组>中剂量组>低剂量组,这为我们临床用药剂量的选择提供了重要的理论依据。