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肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,对人类的健康和生命构成了极大的危害。因此早发现、早诊断、早治疗是提高肺癌患者生存率降低肺癌死亡率的关键,对改善肺癌治疗具有重要意义。
血清是一种成分非常复杂的体液,其中蕴藏着生物体生命过程的相关线索。血清中的蛋白质(尤其是可能与肿瘤相关的低丰度蛋白)往往随一些生理或病理状态的变化而发生变化。作为蛋白质组学的重要分支之一,血清蛋白质组学的应用与研究越来越受到关注。利用蛋白质的分离和鉴定技术,从血清中寻找发生变化的蛋白标志物,可以为疾病的诊断和监测提供一种新的方法。因此血清蛋白质组学在肺癌研究方面具有重要的作用。
本研究采用蛋白质组学中的双向电泳-质谱技术对肺癌患者的血清进行了初步研究。主要内容有:
1.收集正常人和肺癌患者血清,用Album and IgG Depletion SpinTrap试剂盒处理血清,2-D Clean-Up Kit对血清进行除盐,Bradford法测定样品中的总蛋白浓度;用IPG梯度双向凝胶电泳分离正常人及肺癌患者血清总蛋白,经银染或考染显色后,用Image master Lab scan扫描仪和Lab Scan扫描软件获取凝胶图片;
2.建立血清蛋白质组双向电泳分离技术,优化实验条件,最终选择了pH4-7,18cm的胶条,上样量选择150μg,形成了相对稳定的血清蛋白质2-DE分离方法,得到较理想的电泳图谱;
3.在第二章优化的实验条件下,我们得到了两组样品的双向电泳图谱,凝胶经ImageMaster2D Platinum6.0软件分析后,找出差异蛋白质点。从凝胶上挖取部分有差异的蛋白质点,用胰蛋白酶进行酶解,经质谱仪分析获得肽质量指纹图,然后利用Mascot软件查询数据库,从而鉴定相关蛋白质血清补体C3。