SiRNA干扰claudin-1对食管鳞癌细胞Kyse150生物学功能影响的研究

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目的:通过SiRNA瞬时干扰Claudin-1在食管鳞癌细胞Kyse150中的表达,研究其对管鳞癌细胞Kyse150的增殖、周期、侵袭、转移的生物学功能的影响。方法:1、组织芯片检测癌组织和癌旁组织中Claudin-1蛋白的表达水平;2、SiRNA瞬时干扰Claudin-1基因在食管鳞癌细胞Kyse150中的表达;3、MTT法和免疫荧光检测SiRNA干扰Claudin-1基因表达后对食管鳞癌细胞Kyse150增殖的影响;4、流式细胞仪检测SiRNA干扰Claudin-1基因表达后对食管鳞癌细胞Kyse150的周期的影响;5、Transwell检测SiRNA干扰Claudin-1基因表达后对食管鳞癌细胞Kyse150侵袭及转移的影响。结果:1、组织芯片结果显示:Claudin-1蛋白在食管鳞癌组织(30例)中阳性表达21例、阴性表达9例,阳性率为70.00%,在癌旁组织(60例)中阳性表达12例、阴性表达48例,阳性率为20.00%,与癌旁组织相比,食管鳞癌组织中Claudin-1蛋白的表达明显增强(X2=8.743,P=0.002<0.05);在食管鳞癌组织(30例)中:有淋巴结转移(18例),其中16例Claudin-1蛋白阳性表达,2例阴性表达,阳性率88.89%;无淋巴结转移的食管鳞癌组织(12例)中,其中4例Claudin-1蛋白表达阳性,8例表达阴性,阳性表达33.33%,在食管鳞癌组织中,有淋巴结转移的Claudin-1蛋白表达明显高于非淋巴结转移组(X2=7.826,P=0.003<0.05);在食管鳞癌组织(30例)中,Ⅰ级病变(11例)中8例表达阳性(阳性率72.72%),Ⅱ级病变(12例)中8例表达阳性(阳性率66.66%),Ⅲ级病变中5例表达阳性(阳性率71.42%),不同分化程度食管鳞癌组织中Claudin-1蛋白表达无明显差异,(X2=0.278,P=0.563)。Claudin-1的表达和年龄、性别没有关系。2、MTT检测及免疫荧光检测结果表明:与阴性干扰组SiRNA-NC相比,通过SiRNA瞬时干扰Claudin-1在食管鳞癌细胞Kyse150中的表达,可以明显抑制食管鳞癌细胞Kyse150的增殖,差异具有统计学意义(p<0.05);3、流式细胞仪检测结果显示:与阴性干扰组SiRNA-NC相比,SiRNA瞬时干扰Claudin-1在食管鳞癌细胞Kyse150中的表达,可以将食管鳞癌细胞周期阻滞在G1、S期,差异具有统计学意义(p<0.05);4、Transwell结果显示:与阴性干扰组SiRNA-NC相比,通过SiRNA瞬时干扰Claudin-1在食管鳞癌细胞Kyse150中的表达可以明显促进食管鳞癌细胞Kyse150的侵袭及转移,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:1、Claudin-1蛋白在癌组织中高表达,在癌旁组织中低表达;2、Claudin-1能够明显抑制食管鳞癌细胞Kyse150的增殖;3、Claudin-1能够促进食管鳞癌细胞Kyse150的细胞周期的转变;4、Claudin-1能够明显抑制食管鳞癌细胞Kyse150的侵袭及转移。
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