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目的:探索骨髓间充质干细胞对大鼠原代髓核细胞凋亡、自噬的影响。方法:体外分离培养大鼠髓核细胞以及骨髓间充质干细胞,进行共培养实验。通过血清剥夺实验模拟体内椎间盘的低血供的病理状态。通过凋亡染色试剂盒以及流式细胞仪方法检测骨髓间充质干细胞对大鼠髓核细胞凋亡率的影响,并进一步通过Western blot实验方法检测凋亡蛋白active-caspase3、active-casepase 9、促凋亡蛋白Bax以及凋亡抑制蛋白Bcl2蛋白表达状况。随后通过Western blot实验验方法检测自噬标志蛋白LC3、Beclin 1的表达。结果:体外培养的大鼠原代髓核细胞在正常的条件下,自噬、凋亡水平均较低。骨髓间充质干细胞共培养大鼠髓核细胞可以显著提高细胞的自噬水平。OGD造模后,大鼠原代髓核细胞的细胞活性显著降低、凋亡水平、自噬水平均显著上调。在相同的造模时间下,使用骨髓间充质干细胞共培养大鼠髓核细胞的细胞活力提高,而自噬水平显著上升并且凋亡水平显著下降。然而,当骨髓间充质干细胞诱导的自噬被Wortmannin抑制后,细胞凋亡率显著提高。结论:在OGD模型中,骨髓间充质干细胞能够显著提高大鼠髓核细胞的细胞活力,自噬水平,并降低大鼠髓核细胞的凋亡水平。使用Wortmannin抑制骨髓间充质干细胞诱导的自噬后,大鼠髓核细胞的细胞活力显著降低,并且凋亡水平显著升高。这些结果指出,BMSC细胞对NPC细胞的保护作用部分是通过自噬机制进行的。目的:探索骨髓间充质干细胞诱导大鼠原代髓核细胞自噬的机制。方法:通过基因表达谱芯片的方法筛选差异表达以以fold change大于2.5,并且FDR值小于0.01为阈值,筛选差异表达mi RNA。使用q RT-PCR方法检测不同处理方法对mi R155表达含量的影响。使用流式细胞仪器以及透射电镜方法检测anti-mi R-155对细胞自噬的影响。使用Targetscan软件以及荧光素酶报告实验检测mi R-155与BACH1 m RNA之间的直接作用关系,并使用Western blot实验方法进行更进一步的验证。结果:通过基因表达谱芯片的方法我们总共挖掘到了15个差异表达mi RNA,其中与NPC+OGD组相比,mi R-155的表达含量差异最大,因此选择mi R-155作为研究对象进行更近一步的研究。OGD+NPC组相比,OGD+NPC+BMSC组细胞中mi R-155的表达含量显著上升。将成功转染anti-mi R155的BMSC细胞与NPC细胞共培养,结果显示与OGD+NPC+BMSC组细胞相比,转染anti-mi R155的共培养细胞组的mi R-155表达水显著降低。此外我们还使用GW4869(10μM)阻断BMSC细胞的外泌体分泌,结果显示共培养细胞组的mi R-155表达水显著降低。透射电镜与流式细胞术的研究结果显示anti-mi R155显著降低了BMSC诱导的NPC细胞自噬。通过生物信息软件Targetscan预测发现,BACH1可能为mi R-155的潜在作用靶点,如图5A所示。为了更进一步的证实mi R-155与BACH1基因的相互作用关系,我们利用荧光酶素报告实验方法检测NPC细胞中野生型BACH1基因以及突变型BACH1基因对mi R-155及mi R-con的响应,结果指出转染mi R-155的具有野生型BACH1基因的大鼠脊髓原代神经元细胞系的荧光响应强度显著降低,而突变型BACH1基因的NPC细胞,荧光响应强度没有发生显著改变。指出mi R-155通过结合在BACH1m RNA的3′UTR区域从而负向调控BACH1的表达。结论:(1)BMSC细胞通过外外泌体途径使NPC细胞中的mi R155表达含量上升。(2)mi R155在BMSC诱导的NPC细胞自噬扮演着促进细胞自噬的角色。(3)mi R-155通过结合在BACH1 m RNA的3′UTR区域从而负向调控BACH1的表达mi R-155可能通过BACH1影响细胞自噬。