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周围神经缺损可直接导致机体感觉或运动功能的丧失,并增加了二次并发症的风险,进而严重影响机体正常功能的行使,有的甚至需要终生维持治疗,不但影响了患者的生活质量,甚至给社会经济造成了不同程度的影响。周围神经缺损的修复是神经创伤研究的难点。目前,自体神经移植(autologous nerve transplantation,ANT)仍是治疗周围神经缺损的“金标准”,但其存在来源不足,不能修复大范围神经缺损等缺点[5，6]。将应用组织工程学的方法和原理制备出的脱细胞异种神经支架,运用于修复周围神经的大范围缺损便成为此研究领域的热点。本课题正是基于上述理念,制备一种新型的人工神经移植物并对其生物力学性能进行评价。第一部分Myroilysin脱细胞异种神经支架的制备目的：获取一种新型的脱细胞异种神经支架。方法：获取健康Wistar大鼠双侧坐骨神经(15mm)后,应用Myroilysin酶的不同活性浓度对其进行脱细胞处理,肉眼观察及制作组织切片经HE染色、Masson染色后光学显微镜下观察此脱细胞异种神经支架的胶原结构、所保留神经基底膜结构以及整体的脱细胞效果。结果：肉眼观察可见高浓度的Myroilysin酶(500IU/mL,600IU/mL)所制备出脱细胞异种神经支架已几乎完全被溶解掉,其长度较实验前明显缩短,余均可见体积较正常神经有明显膨胀现象,且色泽透明。组织学观察,HE染色镜下可见低浓度的Myroilysin酶(200IU/mL,300IU/mL)所制备出的脱细胞异种神经支架有大量细胞核的残留。Masson染色镜下可见不同浓度Myroilysin酶所制备出的脱细胞异种神经支架胶原纤维的排列都较规则,但随着浓度的增高胶原纤维间的间隙逐渐增大。通过多次反复实验我们最终确定400IU/mL的Myroilysin酶脱细胞效果最佳。结论：Myroilysin酶法是一种新型的脱细胞异种神经支架的制备方法；且通过肉眼观察及组织学观察,400IU/mL的Myroilysin酶脱细胞效果最佳。见体积较正常神经有明显膨胀现象,且色泽透明。组织学观察,HE染色镜下可见低浓度的Myroilysin酶(200IU/mL,300IU/mL)所制备出的脱细胞异种神经支架有大量细胞核的残留。Masson染色镜下可见不同浓度Myroilysin酶所制备出的脱细胞异种神经支架胶原纤维的排列都较规则,但随着浓度的增高胶原纤维间的间隙逐渐增大。通过多次反复实验我们最终确定400IU/mL的Myroilysin酶脱细胞效果最佳。结论：Myroilysin酶法是一种新型的脱细胞异种神经支架的制备方法；且通过肉眼观察及组织学观察,400IU/mL的Myroilysin酶脱细胞效果最佳。第二部分Myroilysin与Sondell脱细胞神经支架的对比观察目的：比较Myroilysin酶法与Sondell化学法制备的脱细胞异种神经支架的异同。方法：获取健康Wistar大鼠双侧坐骨神经(15mm)后,分别应用400IU/mL Myroilysin酶和经典Sondell化学法对其进行脱细胞处理。肉眼观察并制作组织切片,切片经HE染色及Masson染色后光学显微镜下观察脱细胞异种神经支架的胶原结构、所保留神经基底膜结构以及整体的脱细胞效果。同时制作电镜标本在扫描电镜下观察不同脱细胞神经支架的表面物理性状。结果：两种方法所获得的神经支架相比,Myroilysin脱细胞异种神经支架的直径及体积要明显大于Sondell脱细胞神经支架。与天然神经相比,两者的直径及体积均大于天然神经,但Myroilysin脱细胞异种神经支架较天然神经更明显膨胀,且色泽透明,Sondell脱细胞异种神经支架的直径只略大于天然神经。组织学观察,HE染色两种支架均可见细胞核、轴突、髓鞘结构消失；神经基底膜结构红染,呈波浪状,但与Sondell神经支架相比,Myroilysin神经支架排列均匀一致且连续性好。Masson染色可见,Sondell神经支架胶原纤维排列不规则,且纤维结构的连续性差,部分纤维结构已被破坏,而Myroilysin神经支架排列相对规则且连续。结论：通过上述比较可知,Myroilysin酶法将成为一种新型的且更具有优势的神经支架的制备方法。第三部分Myroilysin脱细胞异种神经支架的生物力学性能目的：应用生物力学测试仪器,评价Myroilysin脱细胞异种神经支架的生物力学性能,为后期的体内实验研究做准备。方法：应用Endura TEC ELF 3200力学测试仪器,通过测试正常神经(A组)、Sondell化学法(B组)及Myroilysin酶法(C组)获得的脱细胞异种神经支架的极限载荷、弹性模量、韧度、极限应力、极限应变、断裂功耗等生物力学性能指标,比较三者之间的生物力学性能差异有无统计学意义。测试数据结果用均数±标准差表示,采用SPSS16.0进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD检验。P<0.05表示差异有统计学意义。结果：P值均大于0.05,即A、B、C三组在极限载荷、弹性模量、韧度、极限应力、极限应变、断裂功耗等生物力学特性方面的差异无统计学意义。结论：与Sondell脱细胞神经支架及正常神经相比,Myroilysin脱细胞异种神经支架的生物力学性能较好,符合后期体内实验的要求。