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X染色体失活是哺乳动物维持雌雄性细胞中X染色体连锁基因剂量平衡的一种机制。它存在随机失活(父性和母性来源的X染色体等机率失活)和印记失活(父性来源的X染色体定向失活)两种方式,但是X染色体调控元件(Xce)等遗传和表观遗传因素会导致X染色体偏斜式失活,即X染色体偏向父性或母性一方失活。我们采用双荧光素酶报告基因检测系统和凝胶迁移实验比较了Musmusculus musculus(129)和Mus musculus castaneus strain(cast)小鼠品系的Tsixmajor promoter,Xite,DXPas34,Xist minimal promoter区域的活性,寻找出Xistminimal promoter是一个Xce,且-88位的A/C碱基差异是导致129和cast Xistminimal promoter活性差异的主要原因。
另外,我们初步建立了DNA亲和纯化体系。我们用来源于Xist intron1的2b1-3 DNA探针纯化和质谱鉴定出PTB,但经凝胶迁移实验超迁移和染色体免疫共沉淀验证出PTB并不结合Xist2b1-3。因此我们还需要通过提高蛋白纯化效率、回收效率和胶分辨率等来优化DNA亲和纯化体系,寻找到特异DNA序列上的结合蛋白。