【摘 要】
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目的:对比地屈孕酮和低、中、高剂量的苎根合剂含药血清对高龄肾虚血热型先兆流产患者原代滋养细胞的培养结果,从滋养细胞生长特性、增殖凋亡情况、血清激素水平变化、激素受体及免疫耐受机制等方面,探讨苎根合剂促进滋养细胞增殖的作用机理。方法:制备苎根合剂中药液及地屈孕酮溶液,对大鼠随机分组并进行灌胃饲养6d后提取大鼠血清,相应制得低、中、高浓度苎根合剂组含药血清、地屈孕酮组含药血清和空白对照组动物血清,灭活
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目的:对比地屈孕酮和低、中、高剂量的苎根合剂含药血清对高龄肾虚血热型先兆流产患者原代滋养细胞的培养结果,从滋养细胞生长特性、增殖凋亡情况、血清激素水平变化、激素受体及免疫耐受机制等方面,探讨苎根合剂促进滋养细胞增殖的作用机理。方法:制备苎根合剂中药液及地屈孕酮溶液,对大鼠随机分组并进行灌胃饲养6d后提取大鼠血清,相应制得低、中、高浓度苎根合剂组含药血清、地屈孕酮组含药血清和空白对照组动物血清,灭活补体并封存备用。获取无菌新鲜刮宫组织,取部分标本进行病理组织学染色,镜下观察并分析结果。部分组织提取原代人滋养细胞,用含药血清进行培养和检测。周期性镜下观察滋养细胞生长状况并拍照分析,细胞进行台盼蓝染色计数并绘制细胞增殖曲线,ELISA法测定滋养细胞经含药血清培养液培养72h后E2、P、β-HCG、ER、PR、IL-2、INF-γ的分泌水平,采用CCK-8计数法、流式细胞仪检测苎根合剂含药血清对人滋养细胞的增殖与凋亡能力的影响。结果:1.原代人早孕滋养细胞经提取培养后传代后,镜下观察纯度高达95%以上,消化原代细胞并加入台盼蓝染液进行计数,细胞存活率达87%。2.与对照培养组、地屈孕酮培养组比,经苎根合剂培养后的滋养细胞增殖加快,并有较强的生长分化活力,细胞凋亡进程延缓,细胞生长状态优化和改善（p＜0.05）。3.观察滋养细胞生长状况,与对照培养组、地屈孕酮培养组比,苎根合剂组滋养细胞生长状态优化,细胞生物学特性和功能增强,有显著增殖变化,增殖与凋亡存在一定生长周期规律,培养至72 h时增殖数量达到峰值并维持稳定生长。4.CCK-8增殖试验表明,随着含药血清培养时间延长,细胞吸光度值变大,细胞浓度增大（p＜0.05）,苎根合剂培养组滋养细胞活力率比对照培养组、地屈孕酮培养组高（p＜0.05）。5.流式凋亡试验表明,苎根合剂培养组细胞总数多于对照培养组、地屈孕酮培养组（p＜0.05）,处于早期、晚期凋亡的细胞数量低于对照培养组、地屈孕酮培养组（p＜0.05）。6.ELISA检测72h细胞血清培养基,苎根合剂培养组E2、P、β-HCG、ER和PR含量表达上升,IL-2、INF-γ表达下降比对照培养组、地屈孕酮培养组明显（p＜0.05）。结论:苎根合剂在滋养细胞生物学特性上发挥重要作用,能促进滋养细胞增殖,侵袭分化能力增强,延缓细胞凋亡进程。同时也能促进血清中的E2、P、β-HCG及ER、PR等分泌水平提高（p＜0.01）。血清激素分泌水平上升及受体增加,一定程度上能够抑制TH1型IL-2、INF-γ分泌水平（p＜0.05）,对Th1/Th2这一免疫耐受机制起到调节作用,使Th1/Th2机制向TH2偏移,参与细胞免疫,防止滋养细胞受不利因素影响。总之,中药含药血清能够通过促进滋养细胞的增殖,延缓细胞凋亡,在以自分泌或旁分泌的方式调节血清激素和激素受体、免疫因子表达水平,改善高龄妊娠母胎内环境从而维持妊娠。
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