【摘 要】
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背景:TP0136蛋白是梅毒螺旋体的一种外膜蛋白,其等位基因的变异可能是梅毒螺旋体菌株产生表面抗原多样性的一种方式,作为促进免疫逃逸的一般机制,同时保持粘附宿主细胞的基本功能。在梅毒感染动物模型的早期,抗-TP0136抗体对梅毒螺旋体的应答较为广泛,提示抗-TP0136抗体可能在梅毒感染过程中发挥着重要的作用。至今有关抗-TP0136抗体对梅毒感染进展的影响知之甚少。本研究以梅毒兔感染模型探究抗-
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背景:TP0136蛋白是梅毒螺旋体的一种外膜蛋白,其等位基因的变异可能是梅毒螺旋体菌株产生表面抗原多样性的一种方式,作为促进免疫逃逸的一般机制,同时保持粘附宿主细胞的基本功能。在梅毒感染动物模型的早期,抗-TP0136抗体对梅毒螺旋体的应答较为广泛,提示抗-TP0136抗体可能在梅毒感染过程中发挥着重要的作用。至今有关抗-TP0136抗体对梅毒感染进展的影响知之甚少。本研究以梅毒兔感染模型探究抗-TP0136抗体对梅毒感染病变进展的影响。方法:采用新西兰兔免疫接种TP0136后的攻毒实验,评估抗-TP0136抗体在梅毒螺旋体感染过程中的作用。其中,免疫组新西兰兔于皮下多点免疫接种重组rTP0136蛋白,产生高滴度的抗-TP0136抗体后,进行免疫攻毒（背部十个点各接种105/mL的螺旋体菌液）;定期观察背部注射部位皮损变化,定期抽血进行血清学检测;于皮损出现的第16天起每周进行组织活检,分析其螺旋体的载量（包括tp0574 mRNA和DNA）、细胞因子和组织学变化;于创面愈合时处死动物,转种新的新西兰兔进行兔感染试验,评估抗-TP0136抗体的保护作用。对照组动物注射生理盐水替代rTP0136蛋白。结果:免疫攻毒后,两组动物（免疫组和对照组）血清学变化（P＞0.05）、皮损出现的平均时间（8.7±1.5 dvs.8.5±0.6d,P＞0.05）、皮损直径大小（P＞0.05）、皮损出现比例（100%vs.95%,P＞0.05）或溃疡性病变的比例（92.5%vs.90%,P＞0.05）均无显著差异。在攻毒后不同时间点对动物皮损组织进行活检,H＆E染色显示,皮损组织炎症细胞浸润明显高于对照组,显示出更为强的炎症反应;皮损组织tp0574DNA载量高于对照组,但无统计学差异（P＞0.05）,tp0574mRNA表达水平均显著高于对照组（P＜0.05）;同时采用实时定量RT-PCR检测皮损组织中细胞因子mRNA的表达水平,发现在攻毒后第30天,免疫组IL-10表达水平显著高于对照组（P＜0.05）,免疫组细胞因子IFN-γ和IL-2mRNA表达水平均高于对照组,但没有显著的统计学差异（P＞0.05）。IL-4和TNF-α细胞因子重复三次实验后仍未检出。有趣的是,免疫组动物的皮损愈合时间显著长于对照组（42 d vs.28 d,P＜0.001）。在皮损愈合后处死动物进行组织转种的兔感染试验发现,所有的转种兔都出现血清学阳性,睾丸悬液暗视野显微镜分析均存在活动的梅毒螺旋体。结论:我们的结果显示,抗-TP0136抗体促进局部病灶炎症细胞的浸润,加重组织损伤,从而显著延迟了伤口愈合的时间,对机体没有保护作用。深入探索抗-TP0136抗体在梅毒感染中的作用,将有助于我们进一步揭示梅毒的发病机制。
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