原麝促卵泡激素β基因克隆及原核表达

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促卵泡激素由α和β亚基组成,激素的生物活性、免疫活性均由β亚基所决定。研究表明,畜牧生产中FSHβ基因已成为衡量动物繁殖性状的候选基因之一,且该基因亦是调控原麝繁殖与泌香的重要基因。本研究以原麝为研究对象,采用基因克隆、原核表达研究原麝FSHβ基因在大肠杆菌中的表达情况,制备原麝FSHβ多克隆抗体,主要结果如下:  本研究参考文献选取引物,扩增得到了原麝FSHβ基因的全序列,基因长为4170bp,编码区(CDS)序列长度为390bp。生物信息学分析,结果表明:原麝FSHβ基因蛋白属于糖蛋白家族成员,为亲水性蛋白。原麝与其它物种的FSHβ基因CDS序列一致性比对,结果表明:原麝与林麝序列同源性最高(98.7%);与梅花鹿序列一致性为93.2%;与牛科动物序列一致性在95.5%-97.0%之间。以FSHβ亚基基因编码区序列、氨基酸序列构建的系统进化树,结果显示:原麝与林麝关系最近。  生物合成FSHβ基因去信号肽序列,并成功构建了去信号肽FSHβ基因的原核表达载体PGEX-6P-1-FSHβ。IPTG诱导表达、超声波破碎菌体。SDS-PAGE凝胶电泳检测:得到大小约为38KDa的融合蛋白,且融合蛋白主要以包涵体的形式存在。Western blot鉴定表明,重组的融合蛋白具有良好的免疫原性。  将得到的融合蛋白纯化后免疫小鼠,分离小鼠血清,得到FSHβ多克隆抗体,对多克隆抗体进行间接Elisa检测,结果表明:抗血清最高效价为1∶51200。
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