枯芩与条芩化学成分差异及抗炎、抗肿瘤谱效关系研究

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目的:黄芩为中医临床常用清热燥湿、泻火解毒药物,根据外观性状,黄芩饮片有枯芩和条芩之分。古代医家认为枯芩专泻肺胃上焦之火,而条芩专泻大小肠下焦之火。然而,目前临床对枯芩与条芩的应用未进行区分,处方均为黄芩,可能会影响黄芩临床用药的精准化。本研究运用现代分析技术、化学计量学方法对枯芩与条芩的化学成分进行分析,同时进行抗炎、抗肿瘤活性评价,采用谱效相关分析方法研究影响枯芩与条芩药效差异的主要成分,以期为二者的临床用药提供理论依据。方法:收集不同产地枯芩与条芩药材,采用HPLC分析方法,获得黄芩指纹图谱;采用指纹图谱相似度评价方法获得各样品共有峰信息,并分别采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)方法对共有峰的单位质量峰面积进行分析;采用HPLC-Q-TOF/MS对共有峰进行定性分析。采用脂多糖(Lipopolysaccgarudes,LPS)诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症模型,以NO、TNF-α IL-6抑制率为指标,考察各枯芩与条芩提取物的抗炎活性;分别采用A549、HCT116两种肿瘤细胞模型,以肿瘤细胞增殖抑制率为指标,考察各黄芩提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用;以各色谱峰的单位质量峰面积为自变量,炎症因子抑制率和肿瘤细胞半数抑制浓度(IC50)为因变量,采用灰色关联度分析(GRA)和偏最小二乘(PLS)回归分析进行谱效关联,建立黄芩提取物的抗炎、抗肿瘤活性的谱效关系。结果:①1 0批枯芩和12批条芩的指纹图谱分析确定了 1 5个共有色谱峰,PCA分析显示,除个别批次外,枯芩与条芩样品可实现良好的区分。②通过OPLS-DA数据分析方法找到了区分枯芩与条芩的主要成分标志物8 个,分别为峰 15、1 2、10、13、11、1、4、和 1 4,经 HPLC-Q-TOF/MS鉴定峰 15、13、11 和 1 4 分别为 Oroxylin A、Wogonin、Baicalein 和Scullcapflavone Ⅱ。③各枯芩提取物与条芩提取物在200 μg·mL-1浓度下对NO、IL-6和TNF-α的释放均具有抑制作用。枯芩和条芩提取物作用72 h后对两种癌细胞均具有显著的抑制效果。IC50值组间t检验发现各枯芩样品对A549和HCT116细胞的抑制效果显著高于各条芩样品。其中各提取物对HCT116细胞的抑制效果优于A549细胞。④偏最小二乘(PLS)和灰色关联(GRA)分析结果显示,峰1、3~4、6~8、10~11、13~15为黄芩抗炎活性的主要成分;峰6、10~14为黄芩提取物中对A549细胞抑制作用发挥主要作用的成分,峰10~15为黄芩提取物中对HCT116细胞抑制作用发挥主要作用的成分。结论:枯芩与条芩共有峰中15、12、10、13、11、1、4、和14的含量是区分枯芩与条芩的指标成分。在200 μg·mL-1浓度下,枯芩与条芩提取物对炎症因子的释放及A549、HCT116肿瘤细胞均具有较好的抑制作用,显示黄芩具有较好的抗炎及抗肿瘤活性。通过谱-效关系分析,发现了与抗炎活性密切相关的活性成分,结合枯芩与条芩差异指标成分,发现峰4、10~11、13~15是黄芩抗炎活性差异的主要指标成分;峰10~14是影响枯芩与条芩对A549抑制率差异的主要指标成分;峰 10~15是影响枯芩与条芩对HCT116抑制率差异的主要指标成分。综上可见,条芩与枯芩各化学成分含量的差异可影响其药效活性,并且对不同的药效,影响的成分的种类也有差异,说明了中药药理作用的多成分、多靶点的特点。以上研究为枯芩和条芩功效差异的深入研究提供了科学依据,为二者能够在临床上区别应用提供了一定的指导依据。
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